[發明專利]虎金顆粒劑提取工藝的研究方法

在審

• 申請號: 201610737903.7
• 申請日: 2016-08-29
• 公開（公告）號: CN107782862A
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 楊樂寧
• 申請（專利權）人: 楊樂寧
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及虎金顆粒劑提取工藝的研究方法，具體地說是以虎金顆粒劑提取工藝的研究方法。

背景技術

目前公知的虎金顆粒由虎杖、郁金等組成，經多年的臨床療效觀察及動物實驗研究證明，本方具有良好的抗脂肪肝及抗肝纖維化作用。

發明內容

研究對象：儀器、藥材與試劑；儀器，德國Sartorius電子天平；德國DIONEXP680A高效液相色譜儀(HPLC)；德國DIONEX ASI-１００自動進樣器；德國DIONEXPDA-100二極管陣列檢測器；美國Agilent E8453紫外可見分光光度計；艾科浦ARUS-4-35G-2型臺式超純化水機。藥材與試劑；藥材購于致信藥業有限公司，經廣州中醫藥大學中藥鑒定教研室鑒定；大黃素(emodin)(批號：0756-200211)、1，8二羥基蒽醌(批號：0829-9702)、無水葡萄糖(批號：0833-9501)均購于中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純，水為超純水；其余試劑為分析純。實驗方法與結果：醇提工藝考察方法，以大黃素及總蒽醌含量為指標，按Ｌ9（34）正交表進行實驗，總大黃素含量測定方法，色譜條件，色譜柱：ChromasilC18,5μm,46mm×250mm；流動相：甲醇-0.16mol/L磷酸溶液(85：15）；柱溫：25℃；流速：10mL/min。標準曲線制備，0.204g/L的大黃素對照品溶液按1、4、8、12、16μL注入高效液相儀中，以含量為橫坐標，峰面積為縱坐標，求得回歸方程為y=52954x-01452，r=10，大黃素在0.204～3.26μg范圍內與峰面積呈線性相關。樣品制備及測定；定容至250mL，吸取25mL置于蒸發皿中，水浴蒸干；殘渣用25mol/L硫酸25mL溶解后，按文獻方法處理，定容至50mL；吸取10mL氯仿液于蒸發皿中揮干溶劑，用甲醇定容至10mL，過濾后作為供試液；按8～15μL注入高效液相儀中，按外標二點法求得總大黃素含量。總蒽醌含量(TA)測定；最大吸收波長的確定，取適量標準品溶液、樣品溶液及缺虎杖的陰性樣品溶液，于400～800nm范圍掃描，標準品溶液、樣品溶液均在520nm處有最大吸收，陰性樣品溶液在該處吸收度極低，無其他成分的干擾，故選定520nm為最大吸收波長。標準曲線的制備；0.108g/L的1，8二羥基蒽醌對照品溶液，按文獻方法處理，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，求得回歸方程為y=4483x-0.03000,r=0.9995。對照品在4320～2160g/L范圍內與吸光度呈線性相關。樣品制備及測定方法；定容至50mL，吸取5mL氯仿液于分液漏斗中，按文獻方法處理，定容至50mL作為供試液，于520nm處測其吸光度。正交試驗結果；經直觀分析和方差分析可知，對該工藝影響的因素由大至小依次是Ａ＞Ｃ＞Ｄ＞Ｂ，Ａ、Ｃ差異有顯著性(Ｐ＜0.05），B、D差異無顯著性。結合生產實際情況，選定最佳提取工藝是Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ２，即用245mL體積分數為70%的乙醇，提取2h，提2次。驗證實驗；按最佳工藝，用250倍處方量藥材進行3次驗證，大黃素含量分別是7987mg、8356mg、7868mg，RSD為316%；總蒽醌含量分別是10295mg、98084mg、9542mg，RSD為387%，含量均高于正交9次實驗，且相對誤差均小于5%，該條件下指標成分含量較穩定，因此該工藝是合理可行的。靈芝提取工藝的考察，以總多糖含量為指標按Ｌ9（34）正交表進行實驗，總多糖(TP)含量測定方法；最大吸收波長的確定，取適量顯色后的對照品溶液、樣品溶液，于400-800nm范圍掃描，兩者均在490nm處有最大吸收，故選定最大吸收波長為490nm。標準曲線制備，0.492g/L的葡萄糖對照品溶液按文獻，方法顯色，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，求得回歸方程為y=70056x-0.1405，r=0.9996，葡萄糖在0.01968～0.1181g/L范圍內與吸光度呈線性相關。樣品的制備及測定；提取水煎液，定容至250mL；吸取10mL于蒸發皿中水浴蒸干，用2mL蒸餾水溶解，加入18mL無水乙醇，使含醇量達90%，以3000r/min離心5min，棄上清液，沉淀后用蒸餾水溶解定容至25mL，吸取1mL樣品液，按文獻方法處理后，檢測其吸光度，求出總多糖含量。總多糖(TP)含量測定結果；結果分析，經直觀分析和方差分析可知：因素C、D差異有顯著性(P＜0.05)，因素A、B差異無顯著性。結合生產實際情況，選定最佳提取條件為Ａ１Ｂ１Ｃ３Ｄ３，即不用浸泡，用80mL水煎煮15h，煮3次。驗證試驗，按最佳工藝，用250倍處方量藥材進行3次驗證，總多糖含量分別是31015mg、32440mg、30379mg，RSD為337%，含量均高于正交9次實驗，且相對誤差值小于5%，該條件提取的靈芝多糖含量較穩定，因此，該提取工藝是合理可行的。