[發明專利]高效降解豆粕抗原蛋白的芽孢桿菌及菌酶混合發酵的方法

有效

• 申請號: 201610728880.3
• 申請日: 2016-08-26
• 公開（公告）號: CN106222114B
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 汪以真;石常友;張煜;王成;路則慶;王鳳芹
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/12;C12R1/125
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司33200
• 代理人: 林松海

1.一組高效降解豆粕抗原蛋白的芽孢桿菌，其特征在于，包括兩株芽孢桿菌，屬于枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus subtilis subsp.subtilis ，一株命名為ZJUFA-1，另一株命名為ZJUFA-2，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2016年8月8號，保藏號分別為CGMCC NO：12823，CGMCC NO：12824；用于聯合降解豆粕抗原蛋白。

2.一種菌酶混合發酵的方法，其特征在于，

將玉米、豆粕、麩皮配成復合飼料，以總質量5%添加芽孢桿菌發酵種子液，按0.5~1%添加非淀粉多糖復合酶酶液，混合攪拌均勻后，于30~40℃發酵24小時得到發酵混合飼料，向發酵混合飼料中添加5%的乳酸菌種子液，混合均勻后封裝于厭氧發酵裝置中，發酵48小時后即可得到成品飼料；

所述的芽孢桿菌發酵種子液制備步驟如下：

將新鮮培養的如權利要求1中所述的ZJUFA-1和ZJUFA-2分別接種入5mL LB液體培養基中，培養4~6小時，使OD₆₀₀達到0.5，按1mL培養后的一級種子液按終質量1%~3%加入玉米豆粕浸汁液中放大培養37℃12小時，得到二級種子液，隨后按飼料總質量2.5%分別添加ZJUFA-1和ZJUFA-2二級種子液。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的玉米豆粕浸汁液制備步驟如下：按質量百分比， 配置4%豆粕粉，3%玉米粉，0.8%Na₂HPO₄·12H₂O ，0.4% (NH₄)₂SO₄ , 0.15% NH₄Cl，加入水攪拌10min，配制完成后，濾去不溶物質，90℃滅菌30min。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述玉米、豆粕、麩皮質量配成為4.5:4.5:1。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的非淀粉多糖復合酶酶液主要包括木聚糖酶，纖維素酶和果膠酶。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的乳酸菌種子液制備步驟如下：將新鮮培養的乳酸菌單菌落接種至MRS培養基，37℃靜置培養12小時后，按體積比1%加入豆粕浸汁液中，37℃靜置培養12小時，得到乳酸菌種子液；豆粕浸汁的制備：按質量百分比，配置0.5%糖蜜，4%豆粕，2.5%麩皮，0.2% K₂HPO₄， 0.3%NaAc, 0.08% MgSO₄·7H₂O，0.03%MnSO₄，加入吐溫-80 0.5mL/L, 調pH至6.5，濾去不溶物質，90℃滅菌30min。