[發明專利]從油橄欖葉中提取分離熊果酸的方法

有效

• 申請號: 201610728727.0
• 申請日: 2016-08-25
• 公開（公告）號: CN106349325B
• 公開（公告）日: 2018-03-16
• 發明（設計）人: 黃健軍;謝冬養;陸美珍;葉出良
• 申請（專利權）人: 桂林益天成生物科技有限公司
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司45107
• 代理人: 周兆陽

技術領域

本發明屬于生物提取技術領域，具體涉及一種從油橄欖葉中提取分離熊果酸的方法。

背景技術

油橄欖(Olea europare L.)是世界著名的木本油料樹種，有4000多年的栽培歷史。油橄欖葉的煎劑或浸劑在地中海國家常作為糖尿病的民間用藥，有一定的療效。油橄欖葉提取物在美洲和歐洲用作膳食補充劑以增強免疫功能。現代資料表明，油橄欖葉中含有黃酮類、三萜類、糖類、列環烯醚萜類等有效成分。三萜類化合物主要是由6個異戊二烯結構單元構成，大部分為含30個碳原子的萜類化合物。油橄欖葉中三萜類成分主要包括齊墩果酸、山楂酸和熊果酸，而這三種物質結構相似，通常采用柱色譜技術將其進行分離，但反復硅膠柱色譜分離和重結晶導致最終得到的樣品量很少。又由于柱色譜技術普遍存在處理周期長，連續操作性不強，不易作為分離介質用于生物活性物質的工業生產進程。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供一種從油橄欖葉中提取熊果酸的方法，該方法簡單，周期短，得到的熊果酸純度高，收率大。

本發明提供的技術方案是從油橄欖葉中提取熊果酸的方法，包括以下步驟：

1)將油橄欖葉粉碎后，用體積濃度為70～90％的乙醇溶液提取，將提取液過濾，取濾液減壓回收乙醇，得到粗提物；

2)將粗提物加入體積濃度為50～65％乙醇溶液重新溶解，得到混合溶液；

3)將混合溶液上AB-8大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫至無色，然后采用40～50℃、0.1～0.15mol/L的碳酸氫鈉溶液進行洗脫，再用75～78℃、0.6～0.8mol/L的碳酸氫鈉溶液進行洗脫，收集第三次洗脫液，調節pH至3～5，過濾，取濾渣干燥，即得。

在步驟1)中，采用體積濃度為70～90％的乙醇溶液提取油橄欖葉，可充分提取油橄欖葉中的齊墩果酸、山楂酸以及熊果酸。油橄欖葉與乙醇溶液的料液比為1g：10～20ml。所述提取為加熱回流提取，提取次數為1～3次，每次提取時間為1～3h。

步驟2)中，采用體積濃度為50～65％的乙醇溶液溶解粗提物，可去除粗提物中極性較小的雜質，起到初步純化的效果。加入乙醇溶液至粗提物濃度為0.06～0.10g/ml，此時上柱的吸附效果最佳。

步驟3)中，AB-8型號的大孔樹脂為弱極性，平均孔徑為13～14nm，比表面積為480～520m²/g。由于齊墩果酸、山楂酸、熊果酸均為弱極性物質，且具有一定的疏水性，生成氫鍵的能力較弱，因而易被非極性及弱極性樹脂所吸附。其次，大孔吸附樹脂吸附物質時，被吸附組分是通過樹脂的孔徑擴散到樹脂孔內表面而被吸附，當樹脂孔徑小于吸附的有效成分分子時，有效成分分子不能進入樹脂內部，只能吸附在樹脂外表面，當樹脂孔徑大于有效成分分子時，有效成分既能吸附在樹脂外表面也可吸附在內表面，對山楂酸、齊墩果酸以及熊果酸來說，其分子量分別為472、456和456，因此采用AB-8大孔樹脂的吸附效果較好。樹脂柱的徑高比為1:3～6為宜，以1:4最佳。

齊墩果酸、山楂酸和熊果酸結構極為相似，其中熊果酸和齊墩果酸更是同分異構體，普通的柱色譜很難將其分離開來，但是本發明采用40～50℃、0.1～0.15mol/L的碳酸氫鈉溶液可以與樹脂中極性較大的山楂酸反應生成可溶性鈉鹽，進而洗脫下來，而極性偏小的齊墩果酸和熊果酸的羧基和水分子的極化能力較差，不能電離出H+，無法與碳酸氫鈉進行反應生成鈉鹽，則留在樹脂柱中。碳酸氫鈉溶液的洗脫速度為1～1.5BV/h，其用量為1～1.5BV時，洗脫效果較好。

采用75～78℃、0.6～0.8mol/L的碳酸氫鈉溶液進行洗脫，此時可以洗脫熊果酸，而齊墩果酸不被洗脫，由于齊墩果酸和山楂酸結構為同分異構體，因此，采用較快的洗脫速度2～2.5BV/h，較小的洗脫劑量為0.5～1BV，可最大程度洗脫熊果酸，而齊墩果酸不被洗脫。

本發明的方法簡單、周期短，提取的熊果酸純度高，收率大。

具體實施方式

以下具體實施例對本發明作進一步闡述，但不作為對本發明的限定。

實施例1

1)將油橄欖葉粉碎至100目，與體積濃度為70％的乙醇溶液按料液比為1g：10ml的比例混合，加熱回流提取3h，將提取液過濾，取濾液減壓回收乙醇，得到粗提物；

2)將粗提物加入體積濃度為50％乙醇溶液至粗提物濃度為0.06g/ml，攪勻，得到混合溶液；