[發明專利]從積雪草中提取積雪草苷的方法

有效

• 申請號: 201610726900.3
• 申請日: 2016-08-25
• 公開（公告）號: CN106366152B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 黃健軍;謝冬養;陸美珍;葉出良
• 申請（專利權）人: 桂林益天成生物科技有限公司
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 北京君恒知識產權代理事務所(普通合伙)11466
• 代理人: 譚月萍,黃啟行

技術領域

本發明屬于生物提取技術領域，具體涉及一種從積雪草中提取積雪草苷的方法。

背景技術

積雪草(Centella asiatica(L.)Urban)為傘形科積雪草樹植物，因其葉子酷似馬蹄狀或半個銅錢，所以又名馬蹄草、連錢草等，民間也有地方稱其為胡薄荷、地錢草等。積雪草在許多國家和地區的傳統醫藥領域中的應用歷史悠久，我國中醫中藥對積雪草的內服和外用已有兩千年歷史，最早被《神農本草經》一書所收載。據《本草綱目》記載，積雪草味苦、辛，性寒，無毒，歸肝、脾、腎、胃經，其功效為活血、消腫止痛，并有清熱解毒、利尿等。積雪草的化學成分主要有三萜類、黃酮類、多炔烯類和揮發油類等。三萜類主要有三萜皂苷類，如積雪草苷、羥基積雪草苷等，和三萜酸類，如積雪草酸、羥基積雪草酸等。積雪草的化學成分中，三萜類皂苷是研究最早，生物學活性研究最深入的一大類組分。積雪草總皂苷主要由積雪草苷和羥基積雪草苷組成，它們屬于烏蘇烷型的五環三萜皂苷，是積雪草藥理活性的最主要成分。積雪草苷一般先用溶劑法提取，然后采用平均孔徑較小的大孔樹脂進行純化，如HPD-100(平均孔徑為8.5～9.0nm)、HPD-300(平均孔徑為5.0～5.5nm),由于大孔樹脂對目標成分的吸附和篩選針對性不是很強，在吸附過程中很多雜質會吸附到樹脂孔隙中，而解吸時，由于孔隙較小，目標成分并不能解吸完全，因此，純化后的積雪草苷的收率和純度均不高。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供一種從積雪草中提取積雪草苷的方法，該方法提取得到的積雪草苷收率大，純度高。

本發明提供的技術方案是提供一種從積雪草中提取積雪草苷的方法，包括以下步驟：

1)將積雪草粉碎，用60～70v％乙醇溶液回流提取，將提取液過濾，濾液回收溶劑，再加40～50℃水溶解，得到粗提液；

2)往粗提液加入稀土鹽混合，攪勻，得到混合液；

3)將混合液上X-5型號大孔樹脂柱，先水洗至無色，然后用體積濃度為35～45v％乙醇洗脫，薄層層析跟蹤檢測，收集含目標成分的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到積雪草苷。

步驟1)中，乙醇的用量為積雪草重量的10～20倍，回流提取1～3次，每次1～3h。

體積濃度為60～70％的乙醇可充分溶解積雪草中的三萜類物質，包括三萜類總皂苷和三萜酸類物質。積雪草總皂苷由于它們的分子中往往結合有多數糖分子，羥基數目多，能表現出一定的親水性，但是親水性不強，微溶于水中，而三萜酸類極性較小，不能溶于水中。因此采用40～50℃溫水可幫助積雪草皂苷溶解，積雪草酸類物質不溶于水中，以達到去除三萜酸類成分的目的。

步驟2)中，所述稀土鹽為稀土氯化物、稀土硫酸鹽或稀土硝酸鹽。稀土氯化物可以是氯化鑭、氯化鈰、氯化鐠、氯化釹、氯化釤、氯化銪、氯化釓、氯化鋱、氯化鏑、氯化鈥、氯化鉺、氯化銩、氯化鐿、氯化镥、氯化鈧和氯化釔；稀土硫酸鹽可以是硫酸鑭、硫酸鈰、硫酸鐠、硫酸釹、硫酸釤、硫酸銪、硫酸釓、硫酸鋱、硫酸鏑、硫酸鈥、硫酸鉺、硫酸銩、硫酸鐿、硫酸镥、硫酸鈧和硫酸釔；稀土硝酸鹽可以是硝酸鑭、硝酸鈰、硝酸鐠、硝酸釹、硝酸釤、硝酸銪、硝酸釓、硝酸鋱、硝酸鏑、硝酸鈥、硝酸鉺、硝酸銩、硝酸鐿、硝酸镥、硝酸鈧和硝酸釔。

稀土元素與積雪草苷和羥基積雪草苷上羥基、羧基上的氧原子形成配位鍵和，形成化學親和力，根據軟硬酸堿理論，由于稀土是硬酸，積雪草苷和羥基積雪草苷是軟堿，因此，兩者的結合不是特別穩固。

稀土鹽占混合液總重的0.1～0.5％。此時，稀土鹽可充分與目標成分進行配位。

步驟3)中，X-5型號大孔樹脂為非極性樹脂，粒徑為0.3～1.25mm，比表面積為500～600m²/g，平均孔徑為29～30nm。其孔徑遠遠大于積雪草苷的分子粒徑。而稀土的配位數較大，與其進行配位鍵和的含氧官能團數目往往達不到其最高配位數，因此稀土還會與大孔樹脂中的C產生交聯，以達到吸附的效果。

為了保證稀土元素與大孔樹脂的交聯，混合液的上柱速度越小，效果越好，經申請人大量實驗，混合液上柱速度為0.5～0.8BV/h，交聯效果最好。