[發明專利]一種多層自組裝法制備親水樹脂的方法

在審

• 申請號: 201610712374.5
• 申請日: 2016-08-24
• 公開（公告）號: CN107778407A
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 葉明亮;董靖;歐俊杰
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C08F220/32
• 分類號: C08F220/32;C08F222/14;C08F8/32;C08J9/28;C08J9/36;C07K1/22
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發明具體涉及一種多層自組裝法制備親水樹脂的方法，該親水樹脂可用于生命健康領域的糖肽富集。

背景技術

蛋白質糖基化修飾作為一種重要的翻譯后修飾方式，調控著眾多生理過程。采用質譜技術進行蛋白質糖基化分析時，由于生物樣品中糖肽含量低，糖基化位點不均一性強，且存在大量非糖肽抑制和干擾糖肽質譜信號，分析結果往往不理想。因此，在進行質譜分析前，需要采用預富集技術進行樣品前處理。目前已發展了包括凝集素親和色譜法、苯硼酸親和色譜法、酰肼化學法、固定鈦離子親和色譜法以及親水相互作用色譜法等多種方法應用于選擇性分離富集糖蛋白和糖肽。其中，基于親水相互作用色譜法富集策略受到廣泛關注，并已發展了包括瓊脂糖、纖維素、兩性電解質、點擊麥芽糖、點擊殼寡糖、金屬有機骨架材料等多種親水基質。為了制備高鍵合量功能聚合物修飾固體基質，已發展了多種聚合方法。多層自組裝法是一種在平面基質和球體表面包覆多層聚合物常用方法，廣泛應用于細胞粘附、生物傳感器、固定化酶、藥物運輸等領域。該方法具有操作簡單、反應條件溫和、制備成本低、結構可精細調控、單位鍵合量高等多種優點。本發明以環氧樹脂為基質，采用多層自組裝法在其表面包覆多層親水多聚糖(透明質酸和殼聚糖)，制備親水膜涂覆的樹脂。選用標準糖蛋白酶解液為樣品考察親水材料涂覆的樹脂對糖肽富集性能，并進一步應用于鼠肝提取蛋白質中糖蛋白質組學分析。

發明內容

本發明采用懸浮聚合方法以甲基丙烯酸縮水甘油酯為單體，三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯為交聯劑，在致孔劑的存在下制備得到粒徑在100-500μm范圍的多孔微球樹脂。用無水乙二胺與樹脂上的環氧基團反應引入氨基。采用多層自組裝法在其表面包覆多層親水多聚糖(透明質酸和殼聚糖)，制備可用于富集糖肽的親水樹脂。

具體包括如下內容：

(1)多孔環氧樹脂的制備

配制含有分散劑的水溶液，將甲基丙烯酸縮水甘油酯、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、引發劑和致孔劑的混合油相加入水溶液中，加熱攪拌得到多孔微球樹脂。

(2)層層自組裝親水樹脂的制備

首先用無水乙二胺與環氧樹脂混合，加熱攪拌得到胺基樹脂，隨后采用透明質酸和殼聚糖在胺基樹脂上進行層層自組裝包覆，制備得到可用于富集糖肽的親水樹脂。

本發明的有益效果

1.本發明提供了一種層層自組裝親水涂層樹脂的制備方法，制備得到的親水樹脂可以應用于糖肽的富集。

2.本發明所制備得到的親水樹脂經過共價交聯反應后，自組裝試劑從載體上泄漏少、方便儲存等優點。

3.本發明提供的多層自組裝親水樹脂的制備方法，制備成本低。

附圖說明

圖1層層自組裝親水涂層樹脂的制備示意圖，其中n為10-30。

具體實施方案

實施例1

(1)多孔環氧樹脂的制備

配制含聚乙烯醇為10g/L和明膠為20g/L的水溶液1L作為懸浮聚合法制備環氧樹脂反應體系的水相溶液。將120mg過氧化苯甲酰溶于含有12mL甲基丙烯酸縮水甘油酯、3mL三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯和18mL正庚烷的混合溶液中，將該油性混合溶液加入到60mL水相溶液中，得到的油水兩相分層的混合體系在室溫下以300r.p.m.的機械攪拌速度下攪拌1小時，然后將溫度升高至80℃，聚合反應20小時，得到的產物環氧樹脂依次用丙酮和乙醇洗滌三次后于60℃下真空干燥12小時后備用。

(2)多層自組裝親水樹脂的制備

把100mL乙二胺加入10g環氧樹脂里，在90℃下反應5小時。所得樹脂用乙醇清洗3次，真空干燥過夜，得到胺基樹脂。稱取50mg胺基樹脂，用乙醇進行活化，水洗2次，分散于150mL透明質酸水溶液(2mg/mL)，室溫下機械攪拌20min，所得顆粒用水洗3次，再次分散于150mL殼聚糖水溶液(2mg/mL)，室溫下機械攪拌20min，所得顆粒用水洗3次。如此循環操作10次，得到包覆10層的親水涂層樹脂。最后將顆粒分散于150mL含1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(2mg/mL)和N-羥基琥珀酰亞胺(2mg/mL)的碳酸氫銨水溶液(10mmol/L，pH＝5.5)，室溫下機械攪拌，進行交聯反應24h。反應結束后，所得顆粒依次用水、乙醇、乙腈各清洗3次。

(3)多層自組裝親水樹脂富集糖肽