[發明專利]一種高純度磷脂酰絲氨酸的制備方法

有效

• 申請號: 201610709931.8
• 申請日: 2016-08-23
• 公開（公告）號: CN106349283B
• 公開（公告）日: 2017-12-26
• 發明（設計）人: 張永利;羅庚;董浩;洪光宇;樊婷;寇玉鋒
• 申請（專利權）人: 陜西源邦生物技術有限公司
• 主分類號: C07F9/10
• 分類號: C07F9/10;C08F222/14;C08F220/56;C08J9/26
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司61211
• 代理人: 汪海艷

技術領域

本發明涉及一種高純度磷脂酰絲氨酸的制備方法，尤其涉及一種應用分子印跡技術純化磷脂酰絲氨酸的方法。

背景技術

印跡技術是將各種生物大分子從凝膠轉移到一種固定基質上的過程。Southern在1975年首先提出了分子印跡的概念。他將瓊脂糖凝膠電泳分離的DNA片段在凝膠中進行變性使其成為單鏈，然后將一張硝酸纖維素(NC)膜放在凝膠上，上面放上吸水紙巾，利用毛細管作用原理使凝膠中的DNA片段轉移到NC膜上，使之成為固相化分子。載有DNA單鏈分子的NC膜就可以在雜交液與另一種帶有標記的DNA或RNA分子(即探針)進行雜交，具有互補序列的RNA或DNA結合到存在于NC膜的DNA分子上，經放射自顯影或其他檢測技術就可以顯現出雜交分子的區帶。由于這種技術類似于用吸墨紙吸收紙張上的墨跡，因此稱為“blotting”，譯為“印跡技術”。

當模板分子(印跡分子)與聚合物單體接觸時會形成多重作用點，通過聚合過程這種作用就會被記憶下來，當模板分子除去后，聚合物中就形成了與模板分子空間構型相匹配的具有多重作用點的空穴，這樣的空穴將對模板分子及其類似物具有選擇識別特性。

磷脂酰絲氨酸，又稱復合神經酸，英文名Phosphatidylserine，簡稱PS，由天然大豆榨油剩余物提取，是細胞膜的活性物質，尤其存在于大腦細胞中。其功能主要是改善神經細胞功能，調節神經脈沖的傳導，增進大腦記憶功能，由于其具有很強的親脂性，吸收后能夠迅速通過血腦屏障進入大腦，起到舒緩血管平滑肌細胞，增加腦部供血的作用。被譽為繼膽堿和“腦黃金”DHA之后的一大新興的“智能營養素”。專家認為，這種天然物質能夠幫助細胞壁保持柔韌性，并且能夠增強傳送大腦信號的神經遞質的效率，幫助大腦高效運轉，激發大腦的活化狀態。

目前市售磷脂酰絲氨酸，純度規格以20％、40％和50％為主，因其制備過程復雜，實驗條件苛刻，尚未有純度為70％及以上規格的產品批量銷售。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種操作過程簡單、實驗條件溫和的高純度磷脂酰絲氨酸的制備方法，該方法能夠批量生產高純度磷脂酰絲氨酸。通常將純度大于等于70％的磷脂酰絲氨酸稱為高純度磷脂酰絲氨酸。

本發明的技術解決方案是：

提供一種高純度磷脂酰絲氨酸的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：磷脂酰絲氨酸分子印跡聚合物的制備；

1.1：將一份磷脂酰絲氨酸加入反應容器中，向該反應容器加入正己烷，使磷脂酰絲氨酸溶解；

1.2：向步驟1.1的溶液中加入1.5-2份的丙烯酰胺，攪拌0.5-1小時后依次加入15-20份的乙二醇二甲基丙烯酸酯和0.1-0.2份的偶氮二異丁腈，然后向反應容器中充入氮氣，密封加熱至50-70℃，攪拌20-30小時，得到塊狀聚合物；

1.3：將步驟1.2得到的塊狀聚合物粉碎后過60-100目篩，將過完篩的粉末裝入色譜柱中，依次用體積比為15-20:1的甲醇-醋酸溶液、甲醇、體積比為20-30:1甲醇-二乙胺溶液和甲醇沖洗上述色譜柱，收集色譜柱中的固體，低溫干燥后得到分子印跡聚合物；

步驟二：制備高純度磷脂酰絲氨酸；

2.1：將步驟1.3中得到的分子印跡聚合物裝入色譜柱中；

2.2：將低純度磷脂酰絲氨酸溶解于正己烷中，得到磷脂酰絲氨酸粗品溶液；

2.3：將步驟2.2得到的磷脂酰絲氨酸粗品溶液加入步驟2.1的色譜柱上，用用體積比為15-20:1的甲醇-醋酸溶液洗脫，收集洗脫液；

2.4：用正己烷萃取步驟2.3得到的洗脫液，收集并濃縮正己烷相，即得到高純度磷脂酰絲氨酸產品。

檢測純度的方法為：通過HPLC配蒸發光散射檢測器進行檢測，具體過程采用外標法。

本發明的有益效果是：

通過本發明的制備方法可以得到純度大于70％的磷脂酰絲氨酸產品，制備方法簡單，實驗條件溫和，生產成本低，提高了產品的經濟價值。

具體實施方式

實施例一：

首先，稱取20g自制的90％的磷脂酰絲氨酸加入反應容器中，向該反應容器中加100ml正己烷，使得磷脂酰絲氨酸溶解；然后，向該反應容器加入30g丙烯酰胺，攪拌半小時后再依次加入300g乙二醇二甲基丙烯酸酯和2g偶氮二異丁腈，向反應容器中充入氮氣后密封，加熱至50℃恒溫攪拌20小時，得到塊狀聚合物。