[發明專利]一種檢測人sST2蛋白的方法以及試劑盒

有效

• 申請號: 201610707725.3
• 申請日: 2016-08-23
• 公開（公告）號: CN107765014B
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發明（設計）人: 顧悅;趙丹;徐長銀
• 申請（專利權）人: 上海費瑪生物科技有限公司;迪亞萊博(張家港)生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 31266 上海一平知識產權代理有限公司
• 代理人: 崔佳佳;肖艷<國際申請>=<國際公布>=

本發明提供了一種用于檢測人sST2蛋白的非診斷性雙抗體夾心法，該方法具體步驟為：a)從人細胞株中提取ST2基因全長編碼區，經雙酶切后，克隆入pcDNA3.1載體中，構建真核表達載體pcDNA3.1?ST2；b)將真核表達載體pcDNA3.1?ST2轉入釀酒酵母中進行表達，并純化獲得重組人sST2蛋白；c)使用重組人sST2蛋白免疫小鼠制備單克隆抗體并純化，獲得鼠抗人sST2單抗；d)重組人sST2蛋白免疫兔制備兔血清，并純化獲得兔抗人sST2多抗；e)在固相載體上包被鼠抗sST2單抗，使用生物放大系統標記的兔抗人sST2多抗作為二抗；f)建立雙抗體夾心檢測sST2的方法。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體地說涉及一種檢測人sST2蛋白的的方法。

本發明還涉及上述檢測方法的試劑盒。

背景技術

心力衰竭(Heart failure，HF)是嚴重威脅人類健康的臨床綜合征，是多種心血管疾病的終末階段。隨著人口的老齡化，心力衰竭的發病率逐年增加。據報道，因HF住院的患者約占住院心血管病患者的1/6，在過去的20年冠心病引起的心力衰竭由原來的36.8％增至45.6％。因此，HF的早期診斷、危險分層以及心血管事件風險預測對決策治療及改善患者的生活質量，延長其壽命至關重要。

ST2作為HF的新興標志物與其他心衰標志物聯合檢測可提高診斷和預后判斷的精確度。ST2基因表達于肥大細胞、激活的輔助性T細胞2(Th2)、巨噬細胞和心肌細胞。人的ST2基因約40kb，位于人類染色體2q12，可編碼一種可溶性蛋白(sST2)和一種跨膜形式蛋白(ST2L)，兩者的轉錄分別受到不同的啟動子調控。

血清可溶性ST2蛋白(sST2)屬于白介素-1受體家族成員，由培養的單核細胞受到機械張力時產生，是機械應力誘導產生的一種心肌蛋白。sST2拮抗白介素-33(IL-33)通路的激活，IL-33具有抗心肌細胞肥大、心肌纖維化作用，ST2通過拮抗IL-33在血管炎癥和動脈粥樣硬化病理生理過程中發揮重要作用。已有研究證明嚴重心衰患者sST2水平升高，是心衰不良結局的獨立預測因子。

sST2是心臟生物力學受損的標志物，既往研究顯示在不同心臟疾病狀況下測得的血清sST2水平增加。行冠脈結扎的小鼠心肌梗死后血清sST2短暫升高，梗死后第一天循環中升高的sST2水平與肌酸激酶呈正相關，與左室射血分數負相關，而且血清sST2基礎水平較高時可以預測急性心肌梗死30天后發生充血性心力衰竭和死亡的危險性。急診呼吸困難患者血清sST2水平升高，血清基礎sST2水平是這些患者1年后死亡率的強有力的獨立預測指標。

發明內容

本發明目的在于提供一種檢測人sST2蛋白的方法。

本發明另一個目的提供一種利用上述方法實現檢測的試劑盒。

為了實現上述目的本發明提供了一種用于檢測人sST2蛋白的非診斷性雙抗體夾心法，該方法具體步驟為：

a)從人細胞株中提取ST2基因全長編碼區，經雙酶切后，克隆入pcDNA3.1載體中，構建真核表達載體pcDNA3.1-ST2；

b)將真核表達載體pcDNA3.1-ST2轉入釀酒酵母中進行表達，并純化獲得重組人sST2蛋白；

c)使用重組人sST2蛋白免疫小鼠制備單克隆抗體并純化，獲得鼠抗人sST2單抗；

d)重組人sST2蛋白免疫兔制備兔血清，并純化獲得兔抗人sST2多抗；

e)在固相載體上包被鼠抗sST2單抗，使用生物放大系統標記的兔抗人sST2多抗作為二抗；

f)建立雙抗體夾心檢測sST2的方法。