[發明專利]一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條及其制備方法

有效

• 申請號: 201310408079.7
• 申請日: 2013-09-10
• 公開（公告）號: CN104422772A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 黃飚;周衍;鄒霈;呂坤祥;張玨;張藝;周彬
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/533
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 曾少麗

1.一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于：該試紙條包括塑料卡殼、底板以及附著于底板上依次相互交錯排列的樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，所述結合墊上包被有稀土離子微球標記的胃蛋白酶原I單克隆抗體I；所述包被膜上包被有檢測帶和質控帶，所述檢測帶固定有識別不同抗原表位的胃蛋白酶原I單克隆抗體II，所述質控帶固定有兔抗鼠IgG抗體。

2.根據權利要求1所述的一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于：所述的結合墊為聚酯膜，其能夠載有足量的稀土離子微球，且遇樣品后又能迅速釋放微球。

3.根據權利要求1所述的一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于：所述的包被膜為硝酸纖維素膜。

4.根據權利要求1所述的一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于：所述包被膜上包被的檢測帶和質控帶相互平行，所述檢測帶靠近所述結合墊，所述質控帶靠近所述吸水紙。

5.根據權利要求1所述的一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于：所述的稀土離子微球為球內灌注有時間分辨的鑭系元素絡合物，且其直徑范圍為100nm-300nm。

6.根據權利要求1所述的一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于：所述試紙條裝于所述塑料卡殼內。

7.一種制備權利要求1-6任一項所述定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條的方法，其特征在于：所述制備方法包括如下步驟：

（1）在包被膜的不同位置分別固定識別不同抗原表位的胃蛋白酶原I單克隆抗體II和兔抗鼠IgG抗體，形成檢測帶和質控帶；

（2）制備稀土離子微球標記的胃蛋白酶原I單克隆抗體I墊，并噴涂在結合墊上；

（3）在底板上依次相互交錯的黏貼上樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，然后切割成寬度為0.5cm大小，裝入塑料卡殼。

8.根據權利要求7所述的一種制備定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條的方法，其特征在于：所述包被膜的制備方法是：使用含有1%-10%蔗糖的0.01-0.02mol/L的PH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液，分別將識別不同抗原表位的胃蛋白酶原I單克隆抗體II和兔抗鼠IgG抗體稀釋到1mg/ml-1.5mg/ml的濃度，使用定量噴膜儀以1ul/cm的量將二者以0.5cm-1.0cm的間隔噴于硝酸纖維素膜上，35-38℃烘干1-1.5h，加入干燥劑封存備用。

9.根據權利要求7所述的一種制備定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條的方法，其特征在于：所述熒光標記的胃蛋白酶原I單克隆抗體I的制備方法包括以下步驟：

（1）將胃蛋白酶原I單克隆抗體I用0.05mol/L的PH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液在4℃溫度下透析過夜，之后調整濃度為1mg/ml-1.5mg/ml；

（2）使用0.05mol/L的PH為7.2-7.6的MES活化緩沖液洗滌微球，加入碳二亞胺（EDC）和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS），終濃度為20mmol/L，室溫反應10-20分鐘，充分洗滌微球，用0.05mol/L的PH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液復溶后加入透析過的胃蛋白酶原I單克隆抗體I，使胃蛋白酶原I單克隆抗體I與微球的質量比為1:50-4:50，室溫反應2小時，加入含有1%-10%BSA的0.01-0.05mol/L的PH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液，室溫反應30分鐘，洗滌微球，用含有0.05%-1%BSA，0.05%-0.1%Tween-20,0.01-0.05mol/L的PH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖保存液復溶至原體積，使用定量噴膜儀以3ul/cm-5ul/cm噴涂于聚酯膜上，避光，在35-38℃烘干1小時，加入干燥劑封存備用。