[發(fā)明專利]一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310408079.7
• 申請日: 2013-09-10
• 公開（公告）號: CN104422772A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設計）人: 黃飚;周衍;鄒霈;呂坤祥;張玨;張藝;周彬
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫(yī)學研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/533
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 曾少麗

技術領域

本發(fā)明涉及臨床免疫學檢測領域，具體涉及一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條及其制備方法。?

背景技術

胃蛋白酶原（Pesinogen，PG）是胃液中胃蛋白酶的無活性前體，分為胃蛋白酶原I（簡稱PGI）和胃蛋白酶原II（簡稱PGII）。血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形態(tài)和功能，PGI主要由胃底腺的主細胞和頸黏液細胞分泌，血清PGI含量與胃潰瘍、十二指腸潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌等上消化道疾病有密切關系。PGI/PGII的比率對于判斷胃黏膜狀態(tài)和功能也有較高的臨床價值。測定PGI含量檢測出十二指腸潰瘍、萎縮性胃炎，胃炎，胃癌等其他消化道疾病，供臨床檢測和體檢篩查需要。PGI檢測作為非侵入性方法，降低患者痛苦，簡便、經濟、具有普查價值。?

對于胃蛋白酶原I的檢測，目前臨床常用的方法包括：乳膠增強免疫比濁法，酶聯(lián)免疫法（elisa），化學發(fā)光法，時間分辨免疫法，但是這些方法都有各自的特點及不足。乳膠增強免疫比濁法，操作簡單，可以全自動化，但是，其靈敏度不高，無法實現精確定量；ELISA法和時間分辨免疫法定量準確，但手工操作，過程復雜，且不適合單人份和較小批量檢測用。?

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是克服現有技術的缺陷，提供一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條及其制備方法。采用該免疫層析試紙條，不僅能夠提供較高的靈敏度和特異性，操作簡單，滿足臨床檢驗的需要，而且降低了成本，滿足國內市場的需求。?

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供了如下的技術方案：?

本發(fā)明一種定量檢測胃蛋白酶原I的時間分辨免疫層析試紙條，該試紙條包括塑料卡殼、底板以及附著于底板上依次相互交錯排列的樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，所述結合墊上包被有稀土離子微球標記的胃蛋白酶原I單克隆抗體I；所述包被膜上包被有檢測帶和質控帶，所述檢測帶固定有識別不同抗原表位的胃蛋白酶原I單克隆抗體II，所述質控帶固定有兔抗鼠IgG抗體。?

其中，所述的結合墊優(yōu)選為聚酯膜，其能夠載有足量的稀土離子微球，且遇樣品后又能迅速釋放微球。?

其中，所述的包被膜優(yōu)選為硝酸纖維素膜。?

其中，所述包被膜上包被的檢測帶和質控帶相互平行，所述檢測帶靠近所述結合墊，所述質控帶靠近所述吸水紙。?

其中，所述的稀土離子微球選用本領域公知的用于標記抗體的任何鑭系元素微球，微球表面帶有活性基團，可以連接蛋白、糖類等生物物質，內含熒光素。優(yōu)選的稀土離子微球的直徑為100nm-300nm。?

其中，所述試紙條裝于所述塑料卡殼內。?

本發(fā)明還提供了一種制備上述試紙條的方法，其包括如下步驟：?

（1）在包被膜的不同位置分別固定識別不同抗原表位的胃蛋白酶原I單克隆抗體II和兔抗鼠IgG抗體，形成檢測帶和質控帶；?

（2）制備稀土離子微球標記的胃蛋白酶原I單克隆抗體I墊，并噴涂在結合墊上；?

（3）在底板上依次相互交錯的黏貼上樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，然后切割成寬度為0.5cm大小，裝入塑料卡殼。?

其中，所述包被膜的制備方法是：使用含有1%-10%蔗糖的0.01-0.02mol/L的PH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液，分別將識別不同抗原表位的胃蛋白酶原I單克隆抗體II和兔抗鼠IgG抗體稀釋到1mg/ml-1.5mg/ml的濃度，使用定量噴膜儀以1ul/cm的量將二者以0.5cm-1.0cm的間隔噴于硝酸纖維素膜上，35-38℃烘干1-1.5h，加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?

其中，所述熒光標記的胃蛋白酶原I單克隆抗體I的制備方法包快以下步驟：?

（1）將胃蛋白酶原I單克隆抗體I用0.05mol/L的PH為7.2-7.6的磷酸?鹽緩沖液在4℃溫度下透析過夜，之后調整濃度為1mg/ml-1.5mg/ml；?