[發(fā)明專利]一種促進靛藍生物合成轉(zhuǎn)化產(chǎn)量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610705447.8
• 申請日: 2016-08-22
• 公開（公告）號: CN107760736B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設計）人: 張毅;彭帥英;褚仲梅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院上海營養(yǎng)與健康研究所
• 主分類號: C12P17/16
• 分類號: C12P17/16;C12N15/70;C12N1/21
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種生物合成靛藍的方法，包括：

(1) 提供靛藍生物合成細胞，其為大腸桿菌細胞，該細胞共表達細胞色素P450酶和Prefoldin蛋白；所述的細胞色素P450酶是氨基酸序列如SEQ ID NO: 3的蛋白且其氨基酸序列第74位由A突變?yōu)镚、第87位由F突變?yōu)閂、第188位由L突變?yōu)镼、第168位由D突變?yōu)镠；所述Prefoldin蛋白的α亞基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亞基是氨基酸序列如SEQID NO: 2的蛋白；

(2) 培養(yǎng)(1)的靛藍生物合成細胞，加入吲哚為底物，生物合成靛藍。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，在細胞內(nèi)共表達細胞色素P450酶和Prefoldin蛋白的方法包括：

(a) 提供表達載體，所述的表達載體含有細胞色素P450酶表達盒和Prefoldin表達盒；

(b) 將(a)表達載體轉(zhuǎn)化宿主細胞，從而在細胞內(nèi)共表達細胞色素P450酶和Prefoldin蛋白。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，還包括：在細胞內(nèi)共表達選自以下的分子伴侶蛋白：熱休克蛋白60，小熱休克蛋白或它們的組合。

4. 一種提高細胞內(nèi)NADPH/NADP⁺比率的方法，包括：在細胞內(nèi)表達外源的Prefoldin蛋白，該細胞為大腸桿菌細胞；所述Prefoldin蛋白的α亞基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亞基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 2的蛋白。

5. Prefoldin蛋白的用途，用于促進大腸桿菌細胞合成靛藍，所述大腸桿菌細胞是表達細胞色素P450酶的細胞；或用于提高大腸桿菌細胞內(nèi)NADPH/NADP⁺比率；所述的細胞色素P450酶是氨基酸序列如SEQ ID NO: 3的蛋白且其氨基酸序列第74位由A突變?yōu)镚、第87位由F突變?yōu)閂、第188位由L突變?yōu)镼、第168位由D突變?yōu)镠；所述Prefoldin蛋白的α亞基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亞基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 2的蛋白。

6. 一種靛藍生物合成細胞，其為大腸桿菌細胞，該細胞中含有細胞色素P450酶表達盒和Prefoldin表達盒，能共表達細胞色素P450酶和Prefoldin蛋白；所述的細胞色素P450酶是氨基酸序列如SEQ ID NO: 3的蛋白且其氨基酸序列第74位由A突變?yōu)镚、第87位由F突變?yōu)閂、第188位由L突變?yōu)镼、第168位由D突變?yōu)镠；所述Prefoldin蛋白的α亞基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亞基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 2的蛋白。

7. 如權(quán)利要求6所述的靛藍生物合成細胞，其特征在于，該細胞中還含有選自以下的分子伴侶蛋白的表達盒：熱休克蛋白60，小熱休克蛋白，或它們的組合。

8.用于靛藍生物合成的試劑盒，所述試劑盒中包括：含有細胞色素P450酶表達盒和Prefoldin表達盒表達載體；或者

所述試劑盒中包括：共表達細胞色素P450酶和Prefoldin蛋白輔靛藍生物合成細胞，所述細胞為大腸桿菌細胞；

其中，所述的細胞色素P450酶是氨基酸序列如SEQ ID NO: 3的蛋白且其氨基酸序列第74位由A突變?yōu)镚、第87位由F突變?yōu)閂、第188位由L突變?yōu)镼、第168位由D突變?yōu)镠；所述Prefoldin蛋白的α亞基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亞基是氨基酸序列如SEQID NO: 2的蛋白。