[發明專利]一種EB病毒的lgG抗體檢測試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 201610703037.X
• 申請日: 2016-08-22
• 公開（公告）號: CN107247147A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發明（設計）人: 王秀梅
• 申請（專利權）人: 王秀梅
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 貴陽派騰陽光知識產權代理事務所(普通合伙)52110
• 代理人: 管寶偉

1.一種EB病毒的lgG抗體檢測試紙條，其特征在于，該試紙條包括：塑料底板、樣品墊、吸水墊、包被有膠體金標記的EB病毒特異性重組抗原的金標墊聚酯膜、包被有EB病毒單克隆抗體的檢測線和包被有二抗IgM的質控線的硝酸纖維素膜。

2.如權利要求1所述的一種EB病毒的lgG抗體檢測試紙條，其特征在于，所述樣品墊的處理方法是將其浸于硼酸緩沖液中，均勻浸濕，然后在45℃烘干備用。

3.如權利要求1所述的一種EB病毒的lgG抗體檢測試紙條，其特征在于，所述的二抗IgM為兔抗鼠IgM多克隆抗體。

4.如權利要求1所述的一種EB病毒的lgG抗體檢測試紙條，其特征在于，所述的小鼠IgM的濃度為3mg/ml，所述的EB病毒單克隆抗體的濃度為4mg/ml，所述的二抗IgM濃度為2mg/ml。

5.如權利要求1～4任意一項所述的一種EB病毒的lgG抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)膠體溶液的制備：取消過毒的三角燒瓶1個，容量為500ml，加入超純水清洗干凈后，加入超純水248mL，而后加入質量濃度為1％的氯金酸HAuCl₄·3H₂O溶液2mL，配制成250mL0.01％氯金酸水溶液，加熱煮沸并持續攪拌，在攪拌的同時加入質量濃度為1％檸檬酸三鈉Na₃C₆H₅O₇·2H₂O溶液3～5mL，繼續攪拌加熱，當溶液的顏色完全變為透明的紫紅色時，繼續加熱并攪拌5～10min后停止加熱，冷卻至室溫后加入純水至250ml，得到紫紅色膠體金溶液，在2～8℃保存備用；

(2)金標EB病毒特異性重組抗原的制備：取步驟(1)中的膠體金溶液140mL，用0.25mol/LNa₂CO₃調節膠體金溶液的PH至8.5～9.0，用電磁攪拌器以250r/min攪拌，攪拌的同時逐滴加入5mL含0.1mg的EB病毒特異性重組抗原溶液，加入后持續攪拌10min；然后逐滴加入1mL質量濃度為10％的亞硫酸鉍瓊脂作為穩定劑，繼續攪拌10min，然后在2～6℃、2500～2700r/min離心處理30～40min，棄去沉淀；然后將紅色上清溶液繼續在上述離心條件下離心10～20min，棄上清液，收集沉淀，然后加入緩釋劑重懸定容至5ml，即得到金標EB病毒特異性重組抗原；

(3)金標墊聚酯膜的制備：將步驟(2)所制備的金標EB病毒特異性重組抗原稀釋至濃度為2mg/ml，然后用劃膜儀以5μL/cm的濃度均勻噴在載體聚酯膜上，在37℃的恒溫烘箱中烘干；

(4)包被有EB病毒單克隆抗體的檢測線和包被有二抗IgM的質控線的硝酸纖維素膜的制備：EB病毒單克隆抗體稀釋成4mg/ml，然后用劃膜儀以5μL/cm的濃度均勻噴在載體玻璃纖維素膜上，得到檢測線；然后將二抗IgM稀釋成2mg/ml，用三維平面點膜噴金儀儀器HM3055，將稀釋好的二抗IgM均勻噴在硝酸纖維素膜上，得到質控線；

(5)制備試紙條：將樣品墊、金標墊聚酯膜、硝酸纖維素膜和吸水墊自上而下依次粘貼在塑料底板上，組裝成試紙條，然后再切割成一定寬度的長條，再將試紙條安裝在長條扁平殼狀的檢測卡外殼中，即得本發明產品EB病毒的lgG抗體檢測試紙條。