[發明專利]一種改進型遺傳性出血性毛細血管擴張癥相關基因突變檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201610702954.6
• 申請日: 2016-08-22
• 公開（公告）號: CN107760777B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 張羅;趙亞麗
• 申請（專利權）人: 張羅;趙亞麗
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

本發明涉及測遺傳性出血性毛細血管擴張癥相關基因突變檢測試劑盒，通過檢測ACVRL1基因、ENG基因、SMAD4基因及BMP9基因編碼區及側翼序列是否存在突變，而診斷該待測個體中遺傳性出血性毛細血管擴張癥的發生和類型。本發明還涉及一種檢測待測個體中是否存在ACVRL1基因、ENG基因、SMAD4基因及BMP9基因編碼區及側翼序列基因突變的試劑盒，從而判斷待測個體中是否因具有上述基因突變相關的動靜脈畸形、肺動脈高壓等疾病。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及檢測遺傳性出血性毛細血管擴張癥相關基因突變的試劑盒。

背景技術

遺傳性出血性毛細血管擴張癥是一種系統性疾病，平均發病率約為 1/5000-1/800。臨床表現為鼻出血，皮膚粘膜毛細血管擴張以及肺臟、肝臟、胃腸道、腦、脊髓等系統的動靜脈畸形。該病發病年齡從自幼至幾十歲，鼻出血是最常見且最早發現的臨床特征。由于發病較晚，各組織的臨床特征出現的時間不一致，因此，遺傳性出血性毛細血管擴張癥發病初期常常被誤診為單純難治性鼻出血，而內臟動靜脈畸形造成的出血往往是危及生命卻難以發現的臨床病變，因此，目前的臨床診斷策略存在一定局限性。

遺傳性出血性毛細血管擴張癥屬于常染色體顯性遺傳性疾病，男女發病幾率均等。目前發現ENG、ACVRL1、SMAD4及BMP9四個基因突變與其發病有關。按照其致病基因及發病機制的不同將遺傳性出血性毛細血管擴張癥分為四種類型：1)遺傳性出血性毛細血管擴張癥1型與轉化生長因子β (transforming growth factor-beta，TGF-beta)的結合蛋白內皮素(Endoglin， ENG)編碼基因突變有關；2)遺傳性出血性毛細血管擴張癥2型和激酶1樣激活素受體(Activin A receptor,type II-like 1；ACVRL1；Activin receptor-likekinase-1,ALK1)基因突變有關；3)合并青少年息肉病的綜合征型遺傳性出血性毛細血管擴張癥和SMAD4基因(SMA-and MAD-related protein 4)突變有關； 4)遺傳性出血性毛細血管擴張癥5型和骨形成相關蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9,also known asGDF2)有關。遺傳學研究發現約80％遺傳性出血性毛細血管擴張癥和ENG基因和ACVRL1基因突變有關，不同地區，兩個基因相關的遺傳性出血性毛細血管擴張癥患者所占比率不同；約1-2％的遺傳性出血性毛細血管擴張癥分別和SMAD4基因以及BMP9基因突變有關；四個已知的相關基因可解釋約85％的遺傳性出血性毛細血管擴張癥患者的病因。鑒于此，遺傳性出血性毛細血管擴張癥的相關基因ENG、ACVRL1、SMAD4及 BMP9的突變篩查可以為多數患者發現分子病因，實現疾病的早期發現，早期診斷，預防嚴重內臟動靜脈畸形致出血的發生。

中國專利申請CN1003555833A公開了一種家族性遺傳性鼻出血致病基因突變檢測試劑盒，其使用34對特異性引物，檢測ACVRL1基因、ENG基因、 SMAD4基因編碼區突變，在該檢測方法中，其PCR反應需分步進行，擴增 ACVRL1基因和ENG基因，及擴增SMAD4基因分為兩個反應步驟，方法較為繁瑣，且未包含檢測BMP9基因的步驟。

發明內容

本發明目的在于提供用于檢測ACVRL1基因、ENG基因、SMAD4基因及BMP9基因編碼區及側翼序列突變的試劑盒。

本發明將為遺傳性出血性毛細血管擴張癥相關基因突變的臨床和實驗室篩查提供方便確實可靠的方法，有利于該病的早期發現和診斷。

使用本發明的試劑盒的檢測方法為通過采用試劑盒中提供的特異性的 37對引物進行PCR擴增，所述引物如SEQ ID NO：1-74所示，檢測來自于患者的待測樣本中是否存在ACVRL1基因、ENG基因、SMAD4基因及BMP9 基因編碼區及側翼序列突變，而判斷該患者是否為遺傳性出血性毛細血管擴張癥患者，并進行分型診斷。

所述試劑盒特異性引物SEQ ID NO:1-74具體信息如下：