[發明專利]植物中間表達載體及其構建方法與應用有效
| 申請號： | 201610701482.2 | 申請日： | 2016-08-19 |
| 公開（公告）號： | CN106636179B | 公開（公告）日： | 2019-11-08 |
| 發明（設計）人： | 向蓓蓓;王勇;李曉雪;白雪亮;馬琳 | 申請（專利權）人： | 天津中醫藥大學 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82 |
| 代理公司： | 天津市三利專利商標代理有限公司 12107 | 代理人： | 李蕊 |
| 地址： | 300193 *** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 植物 中間 表達 載體 及其 構建 方法 應用 | ||
本發明提供的植物中間表達載體為pEXP?DR，具有序列表中<400>1所示的序列，通過PCR擴增和酶切技術在質粒PSK中連接啟動子、終止子獲得，在植物基因工程載體構建方面具有重要應用價值。
技術領域
本發明涉及生物技術領域，尤其是植物中間表達載體及其構建方法與應用。
背景技術
目前，在構建植物表達載體時，為了構建完整的表達盒和選擇合適的酶切位點，需要將目的片段在多個中間表達載體之間進行多步構建。
而把表達盒和多克隆位點構建在一個載體上，作為通用載體適應于多條目的片段，并自帶表達盒，大大節省了工作人員構建載體的時間，降低了復雜的多步構建中產生的費用，同時也減少了構建過程中出現錯誤的幾率，是現階段技術人員致力研究的技術內容。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在于提供植物中間表達載體。
本發明所要解決的另一技術問題在于提供所述植物中間表達載體的構建方法。
本發明所要解決的另一技術問題在于提供所述植物中間表達載體的應用。
為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：
植物中間表達載體，pEXP-DR，具有序列表中<400>1所示的序列。
上述植物中間表達載體的構建方法，通過PCR擴增和酶切技術在質粒PSK中連接了外源片段DR、啟動子、終止子序列，所述外源片段DR序列為序列表中<400>13所示的序列，啟動子序列為序列表中<400>2所示的序列，所述終止子序列為序列表中<400>3所示的序列。
上述植物中間表達載體在植物基因工程載體構建方面的應用。
本發明的有益效果是：
本發明所述植物中間表達載體pEXP-DR把表達盒和多克隆位點構建在一個載體上，作為通用載體適應于多條目的片段，并自帶表達盒，使植物中間表達載體不僅具有完整的表達盒，而且在各序列的上下游，添加了多克隆位點，便于外源基因片段的導入和該表達盒與各種植物表達載體的連接，大大節省了工作人員構建載體的時間，降低了復雜的多步構建中產生的費用，同時也減少了構建過程中出現錯誤的幾率，使植物基因工程載體構建更加便利和高效。
附圖說明
圖1為載體PEXP構建流程圖；
圖2為pT-PA的PCR和酶切鑒定圖，其中，泳道M：DNA分子量標準Trans2K plus；泳道1：pT-PA的PCR鑒定；泳道2：pT-PA的酶切鑒定；PA所標示的箭頭指向酶切后0.3kb的PA片段；
圖3為pT-TP的PCR和酶切鑒定圖，其中，泳道M：DNA分子量標準DGL2000；泳道1：pT-TP的PCR鑒定；泳道2：pT-TP的酶切鑒定；TP所標示的箭頭指向酶切后0.2kb的TP片段；
圖4為pT-35S的PCR和酶切鑒定圖，其中，泳道M：DNA分子量標準DGL2000；泳道1：pT-35S的PCR鑒定；泳道2：pT-35S的酶切鑒定；35S所標示的箭頭指向酶切后0.8kb的35S片段；
圖5為pSK-PA的PCR和酶切鑒定圖，其中，泳道M1、M2：DNA分子量標準DGL2000、Trans2K plus；泳道1：pSK-PA的PCR鑒定；泳道2：pSK-PA的酶切鑒定；PA所標示的箭頭指向酶切后0.3kb的PA片段；
圖6為pSK-TP-PA的PCR和酶切鑒定圖，其中，泳道M：DNA分子量標準DGL2000；泳道1：pSK-TP-PA的PCR鑒定；泳道2：pSK-TP-PA的酶切鑒定；TP-PA所標示的箭頭指向酶切后0.5kb的TP-PA片段；
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于天津中醫藥大學，未經天津中醫藥大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201610701482.2/2.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
