[發(fā)明專利]利用枯草芽孢桿菌高效表達PI-PLC基因的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610696091.6 | 申請日： | 2016-08-19 |
| 公開（公告）號： | CN106318925B | 公開（公告）日： | 2021-04-02 |
| 發(fā)明（設計）人： | 劉偉;皮雄娥;王欣 | 申請（專利權）人： | 浙江省農業(yè)科學院 |
| 主分類號： | C12N9/16 | 分類號： | C12N9/16;C12N15/75 |
| 代理公司： | 浙江千克知識產權代理有限公司 33246 | 代理人： | 冷紅梅 |
| 地址： | 310021 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 利用 枯草 芽孢 桿菌 高效 表達 pi plc 基因 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種利用枯草芽孢桿菌高效表達磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C（PI-PLC）基因的方法，所述方法如下：
（1）表達載體構建：以SEQ ID No：2所示PI-PLC基因為模板，以P1/P2為引物進行PCR擴增：
引物P1：5’-GCCAAGCTTGCGTCAAGCGTGAAC GAACTGG AAAATTGG-3’；
引物P2：5’-GCCGGATCCTTACCCATCCGACGCGTGCCGGA TTTTTCTGTT-3’；
（2）步驟（1）酶切、回收的目的基因與pBE980a質粒連接，得到重組表達載體pBE980aPI-PLC；
（3）重組表達載體pBE980a PI-PLC轉入大腸桿菌EPI400感受態(tài)細胞，篩選獲得陽性克隆；
（4）步驟（3）陽性克隆的重組質粒電轉化至枯草芽孢桿菌感受態(tài)細胞，篩選陽性克隆，獲得重組基因工程菌；
（5）重組基因工程菌在含有10ug/ml 卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h以上，于培養(yǎng)基上清液獲得PI-PLC。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌WB600或枯草芽孢桿菌WB800。
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