[發明專利]一種從馬比木中提取高純度藥用植物單體喜樹堿的方法

在審

• 申請號: 201610695444.0
• 申請日: 2016-08-20
• 公開（公告）號: CN107760737A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 向旭
• 申請（專利權）人: 恩施州地壹嘉知識產權服務有限公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C07D491/22
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1.一種利用微生物發酵技術從馬比木中提取高純度藥用植物單體喜樹堿的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取工段：先用切片機將馬比木原木切成片料，并用粉碎機將片料粉碎成顆粒裝袋備用。發酵前24小時先按每2噸原料量對酶(1～2kg安琪高糖干酵母或發利干酵母)進行醪化處理。發酵時應將原料與水及醪化液攪拌均勻(人工或機械攪拌好)，放入以整張大棚膜墊好的發酵池中，大棚膜應完好、無破損，裝入原料后將大棚膜各邊收攏捆扎密封，封口處以薄膜捆扎密封，密封保溫。發酵時間大約為2～3天(視氣溫不同)。向每個多功能提取罐中投入適量的、發酵好了的馬比木顆粒。然后向多功能提取罐(8m³)泵至中泵入甲醇進行第一次提取。第二次、第三次提取方法同上(第二次提取甲醇用量：6～8倍物料量；第三次提取甲醇用量：4～6倍物料量)，除去多功能提取罐中的藥渣。

(2)濃縮工段：將儲料罐中的提取液泵至三效濃縮器中，加入適量的抗氧化劑進行濃縮，并回收溶劑。然后將其轉移至單效加入適量的抗氧化劑后進一步濃縮至浸膏。

萃取工段：將浸膏投入到萃取罐(1000L)中，調PH值，并向萃取罐加入適量氯仿，攪拌，靜置萃取，然后重復萃取3～4次，最后取酸水進行HPLC檢測。

(3)復濃縮工段：將萃取液泵至常壓濃縮罐中進行濃縮，并回收氯仿，得粗提物膏體。

(4)精制工段：向粗提物膏體中加入適量的加丙酮，攪拌均勻，靜置12～24小時分層，抽濾，得粗品，母液回收丙酮后得回收母液。將甲醇和氯仿按一定比例混合，溶解上述粗品，攪拌均勻，靜置分層，抽濾，得喜樹堿粗品；然后將喜樹堿粗品溶液堿水，過濾，得清液，加酸水,調pH,靜置分層，抽濾，得喜樹堿粗品；再將喜樹堿粗品溶于適量氯仿,加熱,濃縮，靜置，冷卻,析晶,分層，抽濾，得粗品,母液回收氯仿,其中再析出的喜樹堿回到第2步；將上一步的粗品溶于氯仿,用堿水萃取,少量多次萃取,收集萃取液,調pH,靜置分層，抽濾，得喜樹堿初品；將所得喜樹堿初品溶于混合溶劑裝入打漿瓶中,加熱,過濾；而后用蒸餾水淋洗上一步抽濾的濾餅,洗盡殘余溶劑，得喜樹堿產品；最后減壓干燥喜樹堿產品,粉碎,裝袋,入庫。

2.根據權利要求1所述的利用微生物發酵技術從馬比木中提取高純度藥用植物單體喜樹堿的方法，其特征在于，所述步驟(1)中應先將馬比木發酵。每次加入甲醇的酒精度為70～80，用量為4～10倍物料量；提取時間：3～5小時；提取溫度：25～40℃)。

3.根據權利要求1所述的利用微生物發酵技術從馬比木中提取高純度藥用植物單體喜樹堿的方法，其特征在于，所述步驟(2)應加入的抗氧化劑為二氧化硫和硫酸亞鐵的一種或兩種，數量為濃縮液的2～5％。浸膏需調PH值為2～6后再氯仿萃取。最后當酸水中喜樹堿和9-甲氧基喜樹堿含量低于200升/5克才萃取結束。

4.根據權利要求1所述的利用微生物發酵技術從馬比木中提取高純度藥用植物單體喜樹堿的方法，其特征在于，所述步驟(3)應常壓濃縮罐中進行濃縮，并回收氯仿。

5.根據權利要求1所述的利用微生物發酵技術從馬比木中提取高純度藥用植物單體喜樹堿的方法，其特征在于，所述步驟(4)應向粗提物膏體中加入1～2倍量丙酮，并攪拌均勻，靜置12～24小時后抽濾。

6.根據權利要求1(4)所述的利用微生物發酵技術從馬比木中提取高純度藥用植物單體喜樹堿的方法，其特征在于，喜樹堿的精制的方法為：

a、加甲醇：氯仿＝1：3混合液50～70升溶解上一步的粗品，攪拌均勻，靜置分層，抽濾，得粗品；

b、粗品：NaOH＝1：1～1.2，配成2～5％的堿水溶液，溶解粗品過濾，得清液，加酸水,調pH＝2～6,靜置分層，抽濾，得粗品；

c、一公斤粗品溶于150～250L氯仿,加熱(50～60℃),濃縮到原體積的1/3結束,靜置，冷卻,析晶,分層，抽濾，得粗品,母液回收氯仿,其中再析出的喜樹堿回到第2步；

d、將上一步的粗品溶于氯仿(30L),用2～5％的堿水萃取,少量多次萃取,收集萃取液,調pH＝2～6,靜置分層，抽濾，得粗品；

e、將上所得產品溶于混合溶劑(DMF:甲醇:丙酮＝6:3:2)混合液,裝入打漿瓶中,加熱(80～90℃)2～5小時,趁熱過濾；

f、用蒸餾水淋洗上一步抽濾的濾餅,洗盡殘余溶劑，減壓烘干得高純度喜樹堿產品。