[發明專利]羊來源的低分子肝素及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201610695072.1
• 申請日: 2016-08-19
• 公開（公告）號: CN107759712B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 金永生;靳彩娟;姚亦明
• 申請（專利權）人: 蘇州融析生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10;A61K31/727;A61P7/02
• 代理公司: 北京鼎承知識產權代理有限公司 11551
• 代理人: 李偉波;韓德凱

1.一種羊亭扎肝素鈉的制備方法，包括如下步驟：

稱取預處理過的羊肝素50.0克，加入500毫升純化水，攪拌使肝素溶清，水浴控室溫，調溶液的pH至中性，加入肝素酶溶液10毫升，繼續保溫攪拌，至溶液的A232吸光值增加值在60時，將反應液快速升溫至95℃，保持5分鐘，再快速水冷至室溫，經過濾除去析出的酶蛋白沉淀，然后濾液加入50克氯化鈉，調pH至中性，室溫下繼續攪拌10分鐘以上，除菌過濾，緩慢加入1200毫升甲醇，攪拌15分鐘使反應得到的羊亭扎肝素粗品沉淀，轉移反應液至離心瓶中，離心收集羊亭扎肝素沉淀，沉淀真空干燥后稱重，得到17.8克羊亭扎肝素鈉；

所得羊亭扎肝素鈉抗-Ⅹa活性為91.2單位每毫克，抗-IIa活性為52.7單位每毫克，抗-Ⅹa/抗-Ⅱa比例為1.7；重均分子量為6922Da，其中分子量＜2000Da部分的比例為6.75％，分子量2000-8000Da部分的比例為60.89％，分子量＞8000Da部分的比例為32.36％；并且二糖ΔUA2S-GlcNS6S(ΔⅠS)在羊亭扎肝素鈉中的含量為68.7％。

2.一種羊帕肝素鈉的制備方法，包括如下步驟：

稱取預處理過的羊肝素100.0克，加入2000毫升純化水，攪拌使肝素溶清，保溫50℃攪拌，加入40.0克乙酸鈉和40.0克乙酸銅，再加入200毫升雙氧水，控制反應溫度在50-55℃，控制pH在6-9之間，攪拌18小時，反應結束后調溶液的pH至9.5，加入100克乙二胺四乙酸二鈉，繼續攪拌30分鐘，然后調pH至中性，加入250克氯化鈉，溶解后以6000毫升乙醇以沉淀，離心收集沉淀，沉淀物以純化水溶解，以強陽離子交換樹脂處理，收集未結合的肝素流穿液，再加入氯化鈉至10％濃度，調pH中性，以2.5倍體積乙醇沉淀，得到羊帕肝素鈉粗品，再以1％氯化鈉溶液溶解，加入終濃度為2％的過氧化氫，室溫脫色1小時，調pH中性，無菌過濾，以3倍體積乙醇沉淀，沉淀經純水復溶再凍干，得到羊帕肝素鈉產品54.2克；

所得羊帕肝素鈉抗-Ⅹa活性為89.7單位每毫克，抗-IIa活性為34.9單位每毫克，抗-Ⅹa/抗-Ⅱa比例為2.6；重均分子量為4711Da；并且二糖ΔUA2S-GlcNS6S(ΔⅠS)在羊帕肝素鈉中的含量為70.6％。

3.一種羊亭扎肝素鈉，其根據權利要求1所述的制備方法得到。

4.一種羊帕肝素鈉，其根據權利要求2所述的制備方法得到。

5.根據權利要求3所述的羊亭扎肝素鈉或根據權利要求4所述的羊帕肝素鈉在制備清真抗凝抗栓藥物中的應用。