[發明專利]一株塔賓曲霉菌CT1及其在鹽堿地解磷方面的應用

有效

• 申請號: 201610694228.4
• 申請日: 2016-08-18
• 公開（公告）號: CN106222096B
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 李學平;謝文軍;榮琨
• 申請（專利權）人: 濱州學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C09K17/14;C12R1/66;C09K101/00
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司37205
• 代理人: 許靜

技術領域

本發明屬于生物技術和農業增產技術領域，具體地說，它涉及一種塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)及其在鹽堿地解磷方面的應用。

背景技術

鹽堿地在我國分布廣泛，尤其在黃河三角洲地區分布有大面積的鹽堿地，使得農業效益低下，作物產量低。磷是植物的必需營養元素之一，但土壤中的磷大多以植物難以利用的無機態或者有機態存在，難以利用的磷占土壤總磷的95％，大大降低了植物對磷的利用效率。

解磷菌可以提高土壤磷的利用，解磷菌在代謝過程中產生各種酶類如植酸酶、核酸酶、磷脂酶和有機酸類，并通過酸化、螯合和離子交換等過程將難溶磷變為可溶磷供植物吸收利用；施加解磷菌能促進土壤有效磷轉化，提高作物產量。鹽漬化土壤作為一種特殊的鹽生環境，分布著各種耐鹽微生物。

發明內容

本發明針對鹽堿地農田作物產量低、磷利用效率低的問題，提供了一株塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)及其在鹽堿地解磷方面的應用。本發明采集黃河三角洲，經分離純化后獲得塔賓曲霉菌CT1，該菌的保藏編號為：CGMCC No.12770；保藏單位為：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏日期為：2016年7月20日；保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

本發明提供的曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)的菌落特征：PDA固體培養基中菌落菌絲成白色，菌落內圈成黑色或深黃綠色，25℃培養7天菌落直徑61-69mm。在無機磷液體培養時，發酵液第四天已經澄清，呈現淡黃色或黃綠色，有輕微的粘稠感，菌絲球呈現不規則的團狀。曲霉菌CT1的分類命名為塔賓曲霉Aspergillus tubingensis。

塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)的細胞形態特征：菌絲細長，枝多，頂囊為球狀，老時黃色或黃褐色。

塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)的生理生化特征：生長溫度20℃～35℃，pH的大小不影響其生長，NaCl耐受性1％～10％。NaNO₃、KNO₃、尿素、(NH₄)₂SO₄、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖下均能正常生長。

塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)ITS序列分析：利用PDA固體培養基培養真菌，刮取平皿表面的菌絲體放入研缽中用液氮研磨。研磨好的菌絲體采用真菌總DNA提取試劑盒提取其基因組DNA。利用真菌ITS序列的PCR通用引物(上游引物為ITS1：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′；下游引物為ITS4：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)進行PCR擴增。采用25μl PCR反應體系：2.5μmol L-1dNTPs、10μmol L-1上游引物、10μmol L-1下游引物、3U Taq plus DNA聚合酶、1×PCR反應緩沖液。PCR擴增程序為：94℃5min；94℃1min，57℃45s，72℃45s，共35個循環；72℃10min。用1.5％瓊脂糖凝膠電泳對PCR擴增產物進行檢測，PCR產物經試劑盒純化后送至北京三博遠志生物科技有限公司測序后，將獲得的DNA序列，輸入GenBank，用Blast程序與數據庫中的序列進行比較分析，利用MEGA4.1軟件進行系統發育樹的構建。分析發現與Aspergillus tubingensis(KP725001)相似度100％，屬于曲霉菌屬。

該曲霉菌能夠很好的分解土壤中的無機磷并對作物產量(小麥和玉米)都具有明顯的增產作用。

本發明的優點和積極效果：

本發明可以有效提高土壤磷的利用率，進而促進作物增產。本發明菌株在鹽濃度為0.03％時解磷能力最強，可達523.5mg/L。在0.03％～6％時，菌株CT1的解磷能力隨發酵液鹽濃度升高降低，但下降不太大。

附圖說明

圖1是塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)解無機磷的效果；

圖2是塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)的菌落形態；

圖3是塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)的細胞形態；

圖4是塔賓曲霉菌CT1(Aspergillus tubingensis)的發酵液形態；