[發明專利]一種基于代謝組學評價石斑魚飼料利用的方法

在審

• 申請號: 201610693514.9
• 申請日: 2016-08-18
• 公開（公告）號: CN107764848A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 吉成龍;鄭珂珂;張月星;吳惠豐
• 申請（專利權）人: 中國科學院煙臺海岸帶研究所
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司21002
• 代理人: 李穎,周秀梅

1.一種基于代謝組學技術評價石斑魚飼料利用的方法，其特征在于：采用核磁共振定性及定量的確定石斑魚肌肉組織的小分子代謝物，而后通過有監督的模式識別法正交偏最小二乘判別分析法(OPLS-DA)篩選代謝物，并選擇穩定變化的代謝物谷氨酸、牛磺酸、組氨酸和苯丙氨酸作為蛋白質代謝相關的生物標志物，進而通過谷氨酸和牛磺酸升高、組氨酸和苯丙氨酸降低來指示飼料利用率高，谷氨酸和牛磺酸降低、組氨酸和苯丙氨酸升高指示飼料利用率低。

2.按權利要求1所述的基于代謝組學技術評價石斑魚飼料利用的方法，其特征在于：1)采用一維氫譜核磁共振檢測的石斑魚肌肉組織代謝組樣品的代謝譜圖，進而定性并定量的確定石斑魚肌肉組織的小分子代謝物；

2)通過有監督的模式識別法正交偏最小二乘判別分析法篩選代謝物，選擇其中穩定變化的谷氨酸、牛磺酸、組氨酸和苯丙氨酸作為蛋白質代謝相關的生物標志物；

3)由上述生物標志物可知，谷氨酸和牛磺酸升高，而組氨酸和苯丙氨酸降低，即為飼料利用率高，生物標志物谷氨酸和牛磺酸降低，而組氨酸和苯丙氨酸升高，即為飼料利用率低。

3.按權利要求1或2所述的基于代謝組學技術評價石斑魚飼料利用的方法，其特征在于：所述一維氫譜核磁共振進而分析獲得代謝譜圖的獲得：

1)樣品經液氮研磨后加入甲醇與水(1:1)提取液，利用高通量勻漿器振蕩勻漿，勻漿液先后加三氯甲烷和水，渦旋混勻后靜置，將離心后的上清液經冷凍離心濃縮系統干燥后，加重水磷酸鹽緩沖液(Na₂HPO₄和NaH₂PO₄，含0.5mmol/L TSP，pH值7.0)充分溶解，離心后取上清，待用；

2)代謝組樣品分析在Bruker AV 500NMR譜儀(Bruker BioSpin，Canada)上進行，獲得¹H-NMR譜圖；

3)利用Matlab ProMetab軟件(ver 7.0；MathsWorks,Natick,MA,USA)，將δ0.2—10.0內的譜圖以0.01譜寬進行分段并積分，再通過Chenomx Suite 7.5軟件(Chenomx Inc.,Canada)分析代謝物的化學位移完成各種主要代謝產物的鑒定并進行定量。

4.按權利要求3所述的基于代謝組學技術評價石斑魚飼料利用的方法，其特征在于：所述步驟2)代謝組樣品分析在Bruker AV 500NMR譜儀(Bruker BioSpin，Canada)上進行，1H觀察頻率為500.18MHz，測試溫度為298K；譜寬6009.6Hz，混合時間0.1s，弛豫延遲時間0.3s，在弛豫延遲和混合期間采用預飽和方式抑制水峰，1D NOESY脈沖序列以保證在預飽和壓制水峰的情況下得到較平整的圖譜基線；累加次數128次，每個樣本核磁掃描均收集到16384個數據點，采用線寬為0.3Hz的指數窗函數進行傅里葉變換，獲得¹H-NMR譜圖，將¹H-NMR譜圖載入TopSpin軟件(version 2.1,Bruker BioSpin,Canada)，對所有的¹H-NMR譜圖進行細致的相位校正和基線調整，并以內標TSP為化學位移參考峰。

5.按權利要求3所述的基于代謝組學技術評價石斑魚飼料利用的方法，其特征在于：所述步驟3)利用Matlab ProMetab軟件(ver7.0；MathsWorks,Natick,MA,USA)，將δ0.2—10.0內的譜圖以0.01譜寬進行分段并積分，除去水峰所在的化學位移區域(δ4.70—5.20)，再經歸一化剩余總的譜峰面積以便比較譜峰之間的強度差異；多元統計分析之前，先將所有的核磁譜對數化處理，以增加低強度峰的權重，其中轉化參數為10^-8；再通過Chenomx Suite7.5軟件(Chenomx Inc.,Canada)分析代謝物的化學位移完成各種主要代謝產物的鑒定并進行定量。