[發(fā)明專利]一種用于釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備的重懸液及釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610687374.4 | 申請(qǐng)日： | 2016-08-19 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN107760613A | 公開(kāi)（公告）日： | 2018-03-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 郭天瑋;鐘云鵬;李彥敏;楊平 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 蘇州泓迅生物科技股份有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N1/18 | 分類號(hào)： | C12N1/18;C12R1/865 |
| 代理公司： | 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司32103 | 代理人： | 汪青,周敏 |
| 地址： | 215123 江蘇省蘇州市蘇州*** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 釀酒 酵母 感受態(tài) 細(xì)胞 制備 重懸液 方法 | ||
1. 一種用于釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備的重懸液，其特征在于：所述的重懸液包括5~15mM的甘氨酸- NaOH緩沖液、占所述的重懸液總體積1~5%的乙二醇、占所述的重懸液總體積2~8%的二甲基亞砜、0.5~1.5M的山梨醇。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備的重懸液，其特征在于：所述的重懸液包括9~11mM的甘氨酸- NaOH緩沖液、占所述的重懸液總體積2~4%的乙二醇、占所述的重懸液總體積4~6%的二甲基亞砜、0.9~1.1M的山梨醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備的重懸液，其特征在于：所述的重懸液包括9.5~10.5mM的甘氨酸- NaOH緩沖液、占所述的重懸液總體積2.85~3.15%的乙二醇、占所述的重懸液總體積4.75~5.25%的二甲基亞砜、0.95~1.05M的山梨醇。
4.一種釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：
步驟（1）、將釀酒酵母菌液于YPD固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)8~24小時(shí)；
步驟（2）、從步驟（1）的YPD固體培養(yǎng)基上挑取單克隆，將所述的單克隆溶于YPD液體培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)8~24小時(shí)；
步驟（3）、將步驟（2）培養(yǎng)得到的菌液轉(zhuǎn)接到Y(jié)PD液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)至菌液的A600為0.8~1.0；
步驟（4）、將步驟（3）培養(yǎng)得到的菌液以450~550×g離心4~6min收集菌體；
步驟（5）、向步驟（4）收集的菌體中加入預(yù)先冰浴的權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的重懸液和0.5~1.5M的二硫蘇糖醇進(jìn)行重懸，然后孵化4~6min；
步驟（6）、將步驟（5）得到的混懸液以450~550×g離心4~6min，收集菌體，然后用0.1~0.3倍的權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的重懸液進(jìn)行重懸，然后分管凍存。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，在恒溫培養(yǎng)箱中在28~30℃下進(jìn)行培養(yǎng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，其特征在于：步驟（2）中，在28~30℃下以100~200轉(zhuǎn)/分鐘的速度進(jìn)行搖床培養(yǎng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，在28~30℃下，在保證足夠的空氣的情況下，以100~120轉(zhuǎn)/分鐘的速度進(jìn)行搖床培養(yǎng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，其特征在于：步驟（2）中的YPD液體培養(yǎng)基的體積為4~6mL，步驟（3）中的YPD液體培養(yǎng)基的體積為40~60mL。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，其特征在于：步驟（5）中，所述的重懸液的體積為8~10mL，二硫蘇糖醇的體積為0.5~1.5mL。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的釀酒酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，其特征在于：步驟（5）中，在孵化器上以90~110rpm的轉(zhuǎn)速、28~30℃下進(jìn)行孵化。
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