[發明專利]一種用于釀酒酵母電轉感受態細胞的制備的重懸液及釀酒酵母電轉感受態細胞的制備方法

在審

• 申請號: 201610687374.4
• 申請日: 2016-08-19
• 公開（公告）號: CN107760613A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 郭天瑋;鐘云鵬;李彥敏;楊平
• 申請（專利權）人: 蘇州泓迅生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/18
• 分類號: C12N1/18;C12R1/865
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 汪青,周敏

1. 一種用于釀酒酵母電轉感受態細胞的制備的重懸液，其特征在于：所述的重懸液包括5~15mM的甘氨酸- NaOH緩沖液、占所述的重懸液總體積1~5%的乙二醇、占所述的重懸液總體積2~8%的二甲基亞砜、0.5~1.5M的山梨醇。

2. 根據權利要求1所述的用于釀酒酵母電轉感受態細胞的制備的重懸液，其特征在于：所述的重懸液包括9~11mM的甘氨酸- NaOH緩沖液、占所述的重懸液總體積2~4%的乙二醇、占所述的重懸液總體積4~6%的二甲基亞砜、0.9~1.1M的山梨醇。

3.根據權利要求2所述的用于釀酒酵母電轉感受態細胞的制備的重懸液，其特征在于：所述的重懸液包括9.5~10.5mM的甘氨酸- NaOH緩沖液、占所述的重懸液總體積2.85~3.15%的乙二醇、占所述的重懸液總體積4.75~5.25%的二甲基亞砜、0.95~1.05M的山梨醇。

4.一種釀酒酵母電轉感受態細胞的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟（1）、將釀酒酵母菌液于YPD固體培養基上培養8~24小時；

步驟（2）、從步驟（1）的YPD固體培養基上挑取單克隆，將所述的單克隆溶于YPD液體培養基中搖床培養8~24小時；

步驟（3）、將步驟（2）培養得到的菌液轉接到YPD液體培養基進行擴大培養至菌液的A₆₀₀為0.8~1.0；

步驟（4）、將步驟（3）培養得到的菌液以450~550×g離心4~6min收集菌體；

步驟（5）、向步驟（4）收集的菌體中加入預先冰浴的權利要求1至3中任一項所述的重懸液和0.5~1.5M的二硫蘇糖醇進行重懸，然后孵化4~6min；

步驟（6）、將步驟（5）得到的混懸液以450~550×g離心4~6min，收集菌體，然后用0.1~0.3倍的權利要求1至3中任一項所述的重懸液進行重懸，然后分管凍存。

5.根據權利要求4所述的釀酒酵母電轉感受態細胞的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，在恒溫培養箱中在28~30℃下進行培養。

6.根據權利要求4所述的釀酒酵母電轉感受態細胞的制備方法，其特征在于：步驟（2）中，在28~30℃下以100~200轉/分鐘的速度進行搖床培養。

7.根據權利要求4所述的釀酒酵母電轉感受態細胞的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，在28~30℃下，在保證足夠的空氣的情況下，以100~120轉/分鐘的速度進行搖床培養。

8.根據權利要求4所述的釀酒酵母電轉感受態細胞的制備方法，其特征在于：步驟（2）中的YPD液體培養基的體積為4~6mL，步驟（3）中的YPD液體培養基的體積為40~60mL。

9.根據權利要求4所述的釀酒酵母電轉感受態細胞的制備方法，其特征在于：步驟（5）中，所述的重懸液的體積為8~10mL，二硫蘇糖醇的體積為0.5~1.5mL。

10.根據權利要求4所述的釀酒酵母電轉感受態細胞的制備方法，其特征在于：步驟（5）中，在孵化器上以90~110rpm的轉速、28~30℃下進行孵化。