[發明專利]一種吸水鏈霉菌的誘變方法

在審

• 申請號: 201610678877.5
• 申請日: 2016-08-17
• 公開（公告）號: CN107760669A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 黃增才
• 申請（專利權）人: 黃增才
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N15/01;C12R1/55
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于微生物領域，具體涉及吸水鏈霉菌的誘變方法。

背景技術

雷帕霉素 (Rapamycin，RPM，RAPA)，又名西羅莫司 (Sirolimus)，是在 1975 年由加拿大 Ayerst 研究所從吸水鏈霉菌 (Strepomyces hygroscopicus) 中分離出來的三烯大環內酯類抗生素，它作為一種新型的高效免疫抑制劑引起了廣泛的關注，同時它又是一種有效的抗真菌劑并具有抗腫瘤的作用。進行大規模發酵和工業化生產，菌種選育最重要的手段之一。

發明內容

鑒于此，本發明目的在于提供一種選育吸水鏈霉菌的方法。

為解決以上技術問題，本發明提供的技術方案是，提供一種吸水鏈霉菌的誘變方法，步驟如下：

1）將吸水鏈霉菌新鮮斜面用20％甘油與0.1％吐溫80洗下，過濾，將過濾后的單孢子原液加水至10ml，按0.85％終濃度加入滅菌的LiCl水溶液，在28℃搖床作用6小時后立即取出，置于波長253.7nm、功率30W的紫外燈下30cm處開蓋振搖照射；紫外光光照射處理后，孢子液于4℃避光放置24h，轉入可見光下，稀釋涂布于0.5％LiCl的分離培養基平皿上，于25℃培養20天；

2）將在分離培養基平皿上長好的單菌落接種在葡萄糖天門冬素培養基斜面上，于25℃培養15天后進行液體發酵；

3）于250ml三角瓶內裝50m1種子培養基，由斜面按種后于28℃振搖培養48小時；

4）于500ml三角瓶內裝50-100ml液體發酵培養基，由種子以5％接種量轉種后于25℃振搖培養96小時，結束發酵。

進一步地，所述分離培養基組分及重量百分比為酵母膏0.1%、牛肉膏0.1%，水解乳蛋白0.2%、葡萄糖1.0%，瓊脂1.2%。

進一步地，所述葡萄糖天門冬素培養基組分及重量百分比為：天門冬素0.05%，K₂HPO₄0.05%，葡萄糖1.0%，瓊脂1.2%。

進一步地，所述種子培養基組分及重量百分比為：黃豆餅粉2.0%，葡萄糖2.5%，淀粉1.0%，(NH₄)₂SO₄0.3%，KH₂P0₄ 0.05%，MgS0₄ 0.05%，CaCO₃ 0.2%。

進一步地，所述液體發酵培養基組分及重量百分比為：黃豆餅粉3.0%，葡萄糖2.5%，(NH₄)₂SO₄0.5%，KH₂P04 0.3%，CaCO₃ 0.3%，液化淀粉2.0%，消沫劑：0.02％，豆油：0.5％，pH 8.0。

與現有技術相比，上述技術方案中的一個技術方案具有如下優點：

本發明利用紫外光處理、光復活和暗修復等方法中菌體效價與發酵上清液效價呈中等程度以上的正相關性，提高菌株的變異幾率。在這種情況下可以用測定發酵上清液效價取代測定菌體效價來進行初篩工作，以排除大量低產型菌落。

具體實施方式

將吸水鏈霉菌新鮮斜面用20％甘油與0.1％吐溫80洗下，過濾，將過濾后的單孢子原液加水至10ml，按0.85％終濃度加入滅菌的LiCl水溶液，在28℃搖床作用6小時后立即取出，置于波長253.7nm、功率30W的紫外燈下30cm處開蓋振搖照射；紫外光光照射處理后，孢子液于4℃避光放置24h，轉入可見光下，稀釋涂布于0.5％LiCl的分離培養基平皿上，于25℃培養20天。分離培養基組分及重量百分比為酵母膏0.1%、牛肉膏0.1%，水解乳蛋白0.2%、葡萄糖1.0%，瓊脂1.2%。

將在分離培養基平皿上長好的單菌落接種在葡萄糖天門冬素培養基斜面上，于25℃培養15天后進行液體發酵。葡萄糖天門冬素培養基組分及重量百分比為：天門冬素0.05%，K₂HPO₄0.05%，葡萄糖1.0%，瓊脂1.2%。