[發(fā)明專利]靶向VEGF與mucin1的抗腫瘤疫苗、編碼基因、表達(dá)載體、表達(dá)工程菌及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610673299.6
• 申請日: 2016-08-16
• 公開（公告）號: CN106279435B
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張會勇;夏文姣;賈恩朝;閆影;蘇靜;路臣桂;朱武凌
• 申請（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;A61K39/00;A61K47/42;A61P35/00;C12R1/84
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發(fā)明公開了一種靶向VEGF與mucin1的抗腫瘤疫苗、編碼基因、表達(dá)載體、表達(dá)工程菌及應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。抗腫瘤疫苗融合蛋白以VEGF165、VEGF165b或其相應(yīng)改構(gòu)的VEGF突變體為表位載體，通過在載體的N端或C端連接至少一段腫瘤相關(guān)抗原mucin1的表位肽段，構(gòu)成具有雙靶向作用的抗腫瘤疫苗。該疫苗中VEGF既能作為表位載體增強(qiáng)與之連接的mucin1表位的抗原性，殺傷過表達(dá)mucin1的腫瘤細(xì)胞，其自身又能作為抗原，產(chǎn)生針對VEGF的抗體，抑制腫瘤血管生成，切斷腫瘤的營養(yǎng)供給。同時，表位載體具有肝素結(jié)合域，可以與肝素瓊脂糖凝膠結(jié)合，有利于后續(xù)的蛋白純化操作。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種靶向VEGF與mucin1的抗腫瘤疫苗，同時還涉及編碼該抗腫瘤疫苗的基因、抗腫瘤疫苗表達(dá)載體、表達(dá)工程菌及應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

目前，惡性腫瘤已成為國民健康的最大威脅。而腫瘤常規(guī)治療方法如手術(shù)、放化療等均有其各自的局限，這也使得免疫治療成為繼常規(guī)療法之后的一種補(bǔ)充療法。在免疫療法中，各種針對腫瘤相關(guān)抗原或免疫檢驗(yàn)點(diǎn)的單抗在腫瘤治療中起著至關(guān)重要的作用。但其代價高昂，需要長期給藥，且存在腫瘤細(xì)胞易產(chǎn)生抗性等問題。理論上，腫瘤疫苗具有高度特異性，其利用患者自身的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗腫瘤反應(yīng)，可產(chǎn)生長期的免疫記憶以阻止腫瘤復(fù)發(fā)。另外，腫瘤疫苗相對容易制備，與常規(guī)療法相比具有副作用小、特異性高、作用持續(xù)時間長等優(yōu)點(diǎn)。在臨床實(shí)驗(yàn)中已證實(shí)能夠有效預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)。

腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程極為復(fù)雜，僅依靠對單一靶點(diǎn)的作用抑制腫瘤生長與轉(zhuǎn)移是極為不現(xiàn)實(shí)的。所以腫瘤疫苗靶向的多靶標(biāo)已成為目前疫苗研究的一個共識。Kaumaya等研究認(rèn)為同時靶向VEGF和HER2的腫瘤疫苗能夠?yàn)榘┌Y的免疫治療提供一種新范式(FutureOncol，2012)。

Mucin1(MUC1)是一種黏蛋白，在正常組織中均有表達(dá)，但在前列腺癌、胃癌、子宮頸癌、乳腺癌等的上皮惡性腫瘤中過表達(dá)，且其N端胞外域變低或者異常糖基化，且隨著碳水化合物側(cè)鏈的縮短，核心肽上覆蓋的表位暴露出來。由于不完全糖基化，核心肽骨架上數(shù)目可變的串聯(lián)重復(fù)區(qū)域也暴露出來，成為一個潛在的細(xì)胞與體液免疫反應(yīng)的靶標(biāo)。其中，位于mucin1蛋白串聯(lián)重復(fù)區(qū)的一個肽段由B細(xì)胞(弱)及T細(xì)胞聯(lián)合表位(STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPP)組成，在臨床實(shí)驗(yàn)中已顯示在某種程度上可對抗早期發(fā)現(xiàn)的小腫瘤或者防治已接受手術(shù)等常規(guī)療法的過表達(dá)mucin1患者的腫瘤復(fù)發(fā)與擴(kuò)散(Pol J，2015)。但是，由肽段組成的表位疫苗往往存在分子量小、免疫原性弱等問題，易于降解，因此需要與載體蛋白連接以增強(qiáng)其免疫原性，延長半衰期。

在過去十年中，針對VEGF-A的抗血管治療已經(jīng)普遍用于各種腫瘤治療中(CritRev Oncol Hematol，2014)。研究認(rèn)為，阻斷VEGF不僅能夠抑制血管生成，還有助于打破腫瘤誘導(dǎo)的免疫抑制(Voron T，2014)。所以，同時靶向VEGF和腫瘤相關(guān)抗原mucin1，從理論上講既可以通過抑制血管生成干擾腫瘤細(xì)胞的營養(yǎng)供應(yīng)，又可以誘導(dǎo)出靶向過表達(dá)mucin1的T細(xì)胞，直接靶向腫瘤細(xì)胞對其進(jìn)行殺傷，達(dá)到協(xié)同抗腫瘤的效果。

目前，國內(nèi)外多數(shù)研究集中在將腫瘤相關(guān)抗原作為靶標(biāo)，尤其是多表位抗原，用牛血清蛋白或者銅藍(lán)蛋白作為載體增強(qiáng)免疫反應(yīng)。然而卻未有將VEGF蛋白作為腫瘤表位載體的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種靶向VEGF與mucin1的抗腫瘤疫苗融合蛋白，其中VEGF既作為表位載體增強(qiáng)與之連接的mucin1表位的抗原性，殺傷過表達(dá)mucin1的腫瘤細(xì)胞，其自身又作為抗原，產(chǎn)生針對VEGF的抗體，抑制腫瘤血管生成，切斷腫瘤營養(yǎng)供應(yīng)，具有雙靶向作用。

同時，本發(fā)明還提供一種編碼上述融合蛋白的基因。

再者，本發(fā)明提供一種靶向VEGF與mucin1的抗腫瘤疫苗表達(dá)載體和表達(dá)工程菌。

最后，本發(fā)明再提供一種抗腫瘤組合物及相關(guān)應(yīng)用。