[發明專利]一種鑒別水稻光敏色素基因PHYB野生型和突變體的分子標記有效
| 申請號： | 201610671769.5 | 申請日： | 2016-08-16 |
| 公開（公告）號： | CN106282345B | 公開（公告）日： | 2019-09-06 |
| 發明（設計）人： | 鄭崇珂;謝先芝;周晉軍;白波;和亞男;孫偉;解麗霞 | 申請（專利權）人： | 山東省水稻研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105 | 代理人： | 韓百翠 |
| 地址： | 250100 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 分子標記 突變體 野生型 酶切 光敏色素 鑒別 突變位點檢測 等位基因型 核苷酸序列 水稻 電泳分析 擴增產物 酶切產物 育種群體 兩條DNA 基因 擴增 引物 篩選 應用 | ||
1.一種用于鑒別水稻光敏色素基因PHYB野生型和突變體的分子標記的引物，其特征是，所述引物為：
上游引物PHYBF4：5’- TGTCACACAAAGCCCCAGCATCATGGATC-3’；
下游引物PHYBR1：5’- AAGGCTATCTGTGCTGAGCC-3’。
2.權利要求1所述的引物在鑒別水稻光敏色素基因PHYB野生型和突變體中的應用。
3.一種鑒別水稻光敏色素基因PHYB野生型和突變體的方法，其特征是，
(1)利用權利要求1所述的上游引物PHYBF4和下游引物PHYBR1對水稻基因組DNA進行PCR擴增；
(2)對步驟(1)得到的PCR擴增產物進行電泳分析：
如果PCR擴增產物大小為175bp DNA片段，則為野生型
如果PCR擴增產物大小為176bp DNA片段，則為突變體
4.一種鑒別水稻光敏色素基因PHYB野生型和突變體的方法，其特征是，
(1)利用權利要求1所述的上游引物PHYBF4和下游引物PHYBR1對水稻基因組DNA進行PCR擴增；
(2)對步驟(1)得到的PCR產物進行BamHⅠ酶切并進行電泳分析：
如果PCR產物不能被BamHⅠ酶切，為175bp DNA片段，則為野生型
如果PCR產物能夠被BamHⅠ酶切，酶切產物為25bp和151bp兩條DNA片段的，則為突變體
5.如權利要求3或4所述的一種鑒別水稻光敏色素基因PHYB野生型和突變體的方法，其特征是，步驟(1)中所述PCR擴增采用的PCR擴增體系為20μL體系，包括如下組分：50ng/μL基因組DNA 2μL；10μM上游引物PHYBF4 0.3μL；10μM 下游引物PHYBR1 0.3μL；2×EasyTaqPCR SuperMix 10μL；ddH2O 補足20μL。
6.如權利要求3或4所述的一種鑒別水稻光敏色素基因PHYB野生型和突變體的方法，其特征是，步驟(1)所述的PCR擴增的反應程序為：94℃預變性3min；94℃ 30s，60℃ 30s，72℃30s，35個循環；72℃后延伸5min。
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