[發明專利]一種用于檢測酪氨酸酶的熒光探針及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201610663952.0
• 申請日: 2016-08-12
• 公開（公告）號: CN106279124B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 馬會民;吳曉峰
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所
• 主分類號: C07D405/06
• 分類號: C07D405/06;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種用于酪氨酸酶檢測的熒光探針及其制備方法與應用。該熒光探針化合物的結構式為式Ⅰ。該酪氨酸酶檢測試劑盒，它包括酪氨酸酶檢測的熒光探針和溶劑；所述酪氨酸酶檢測的熒光探針為所述化合物；其應用于酪氨酸酶檢測及生物樣品分析中。本發明具有操作簡便，成本低，檢測波長長，不受氧化性物質干擾等優點，易于推廣和應用。

技術領域

本發明屬于分子檢測和分子成像領域，涉及一種用于檢測酪氨酸酶的熒光探針及其制備方法與應用。

背景技術

酪氨酸酶是酪氨酸合成的關鍵酶，可特異性催化生物酚類的羥化以及進一步的醌化反應，在多種生理學過程中都發揮著至關重要的作用。在臨床上，酪氨酸酶是黑色素癌的重要標志物。另外，酪氨酸酶被認為與白化病以及帕金森疾病有重要關系。由此可見，酪氨酸酶的檢測具有非常重要的意義。由于目前用來檢測酪氨酸酶熒光探針以及試劑盒存在易受活性氧物質干擾等弊端，因此，發展一種含有新型識別基團且不受活性氧物質干擾的檢測酪氨酸酶的熒光探針具有非常大的應用價值。

半菁骨架因其具有長的波長和良好的穩定性而被廣泛應用于生物分析中，而基于半菁檢測酪氨酸酶的且不受活性氧物質干擾的熒光探針尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測酪氨酸酶的熒光探針及其制備方法與應用。

本發明提供的熒光探針，其結構式為式Ⅰ。

本發明還提供了上述化合物式Ⅰ的制備方法，包括如下步驟：將式II所示半菁與氫化鈉于有機溶劑中混合后攪拌，再加入3-羥基芐溴進行反應，反應完畢得到所述式I所示化合物，為深藍色固體粉末；

上述方法的攪拌步驟中，攪拌的時間為10-20分鐘，具體為15分鐘；

所述攪拌的步驟在惰性氣氛或氬氣氣氛中進行；

所述有機溶劑為甲醇、乙醇、四氫呋喃、乙腈、二甲基亞砜或N,N-二甲基甲酰胺；

所述反應步驟中，溫度為50～70℃，具體為60℃；時間為12～24h；

式II所示半菁與氫化鈉的投料摩爾比為1：2-3；

式II所示半菁與3-羥基芐溴的投料摩爾比為1：1-4，具體為1：2。

另外，上述本發明提供的式I所示化合物在制備熒光探針或制備用于檢測酪氨酸酶的熒光探針中的應用及在酪氨酸酶檢測和/或酪氨酸酶成像中的應用，也屬于本發明的保護范圍。

所述檢測中，激發波長為670nm；發射波長為708nm。

本發明還要求保護一種酪氨酸酶檢測試劑盒，它包括酪氨酸酶檢測的熒光探針和溶劑組成的熒光探針儲備液；

所述酪氨酸酶檢測的熒光探針為所述式I所示化合物。

所述試劑盒中，所述酪氨酸酶檢測的熒光探針在所述熒光探針儲備液中的摩爾濃度為0.01～10mM，具體為0.2mM；

所述溶劑選自甲醇和二甲基亞砜中的至少一種。

本發明提供的檢測待測樣品中酪氨酸酶含量的方法，包括如下步驟：

1)制作標準曲線：

以670nm為激發波長，測定一系列不同濃度的酪氨酸標準反應液在發射波長為708nm處的熒光強度，記為F；

并測定試劑空白在發射波長為708nm處的熒光強度，記為F0，以酪氨酸酶的濃度C為橫坐標，以熒光強度變化值ΔF＝F-F₀為縱坐標，繪制標準曲線；