[發明專利]一種皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存試劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201610662637.6
• 申請日: 2016-08-12
• 公開（公告）號: CN107723240A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 丁旭;候美玲;韓海燕
• 申請（專利權）人: 微基生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04
• 代理公司: 上海宏京知識產權代理事務所(普通合伙)31297
• 代理人: 鄧文武

技術領域

本發明屬于微生物分子生態學領域，特別涉及一種皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存試劑及其制備方法和應用。本發明可應用于常規PCR擴增、Real Time PCR、高通量進行微生物多樣性檢測等。

背景技術

隨著科學技術的發展和人們生活水平的不斷提高，越來越多的人意識到口腔、皮膚、生殖道微生物對人體健康有著重要的影響。隨著測序技術的成熟和成本的下降，越來越多的個人和單位將口腔、皮膚、生殖道微生物檢測作為身體健康檢查的一項。樣品的采集和保存是檢測口腔、皮膚、生殖道微生物的第一步，也是關鍵一步。正確的采集和保存樣品，可以更加真實地反應人體口腔、皮膚、生殖道微生物的多樣性。

目前對于口腔、皮膚、生殖道微生物多用采集拭子采集樣品。由于微生物具有頑強的生命能力，在樣品采集后，樣品中的微生物仍然可以利用樣品自身的營養物質進行生長繁殖。若將樣品長時間放在室內等普通環境中，樣品中的微生物的種類和數量會發生改變，無法真實反映人體口腔、皮膚、生殖道微生物的多樣性。目前最理想的樣品保存方法，是將采集到的樣品立即放于液氮或-80℃冰箱內冷凍保存。在一段時間內，在液氮或-80℃冰箱環境中的樣品，其微生物的種類及數量不會發生顯著的變化。但在許多醫院、實驗室、家庭無法實現用液氮或-80℃冰箱保存樣品。

由于測序儀費用較高，多數醫院、實驗室沒有測序儀，目前多數樣品快遞到檢測公司進行檢測。在運輸過程中，采用干冰實現低溫環境。往往1g的樣品需要3-4公斤甚至10公斤以上的干冰進行寄送，運輸的成本會大大提高。

發明內容

本發明要解決的技術問題之一在于提供一種皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存試劑，無需凍存，即可達到穩定其中微生物及其組成的作用。在室溫甚至更高溫度條件下(37℃)，保存時間長達14天之久。從而使樣品的保存、運輸變得更加容易，可有效降低運輸成本，對于樣品的保護也更加安全、簡便、易于實現。

本發明要解決的技術問題之二在于提供上述皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存試劑的制備方法。

本發明要解決的技術問題之三在于提供上述皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存試劑的應用。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

在本發明的一方面，提供一種皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存試劑，包括：pH緩沖劑Tris-HCl；離子強度維持劑NaCl；蛋白變性劑十二烷基硫酸鈉(Sodium dodecyl sulfate，SDS)；蛋白質降解劑蛋白酶K；抑菌劑乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA)；蛋白酶保護劑海藻糖。

作為優選，所述的pH緩沖劑Tris-HCl的濃度為1～50mM，pH值為7.0～8.0。

作為優選，所述的離子強度維持劑NaCl的濃度為50～500mM。

作為優選，所述的蛋白變性劑十二烷基硫酸鈉(Sodium dodecyl sulfate，SDS)的濃度為0.1％～1％。

作為優選，蛋白質降解劑蛋白酶K的濃度為50～100μg/mL。

作為優選，所述抑菌劑為乙二胺四乙酸(EDTA)的濃度為1～100mM。

作為優選，蛋白酶保護劑海藻糖的濃度為1～100mM。

在本發明的另一方面，提供該皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存試劑的制備方法，包括如下步驟：

(1)將所述pH緩沖劑Tris-HCl、離子強度維持劑NaCl、抑菌劑乙二胺四乙酸混合；

(2)在上述混合試劑中，依次加入所述蛋白變性劑十二烷基硫酸鈉、蛋白酶保護劑、海藻糖蛋白質降解劑蛋白酶K，充分混合均勻。

在本發明的另一方面，提供一種上述微生物保存試劑在皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存方法中的應用。

作為優選，所述皮膚、口腔、生殖道樣品中的微生物保存方法為：將皮膚、口腔、生殖道樣品加入項所述的微生物保存試劑中，在室溫條件下保存。

作為優選，所述在室溫條件下保存為在4℃～37℃環境下保存。

作為優選，所述皮膚、口腔、生殖道樣品的拭子數量(個)與微生物保存試劑的體積(mL)比為2:1～1:10。

作為優選，所述保存的時間長達14天。

與現有技術相比，本發明的有益效果在于：