[發明專利]一種使用大孔吸附樹脂提取純化發酵液中紅景天苷的方法

在審

• 申請號: 201610645506.7
• 申請日: 2016-08-05
• 公開（公告）號: CN107686492A
• 公開（公告）日: 2018-02-13
• 發明（設計）人: 劉濤;莊以彬;何慶林
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C07H1/06
• 分類號: C07H1/06;C07H15/18
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所12201
• 代理人: 陸藝

技術領域

本本發明涉及發酵產物的提取純化，特別涉及一種使用大孔吸附樹脂提取純化發酵液中紅景天苷的方法。

背景技術

紅景天是生長在高寒無污染地帶的珍稀野生植物，是我國藏族人民的習用藥物，至今已有1000多年的應用歷史，具有刺激神經系統、增加工作效率、消除疲勞和預防高山癥等作用。除此之外，紅景天還具有保護心腦血管，神經細胞以及抗腫瘤抗輻射等功能。紅景天的主要藥用活性成分是紅景天苷及其苷元酪醇。近年來，以紅景天苷作為主要原料生產的藥劑、飲料、食品以及化妝品等產品種類越來越多，其苷元酪醇是一種具有重要工業價值的酚類化合物，酪醇及其衍生物是多種有機化合物的合成前體。人們對紅景天苷及其苷元酪醇的關注程度不斷提高。紅景天苷(Salidroside)具有以下特征：化學名稱為2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-β-D-glucopyranoside，分子式為C₁₄H₂₀O₇，分子量為300.304，CAS號為10338-51-9。其苷元酪醇(Tyrosol)具有以下特征：化學名稱為4-(2-Hydroxyethyl)phenol，分子式為C₈H₁₀O₂，分子量為138.164，CAS號為501-94-0。

目前，紅景天苷的生產主要是對紅景天植株進行化學提取。野生紅景天生長條件惡劣，植被資源稀有，而且紅景天苷的量很低，如現在最常用的高山紅景天和大花紅景天，其植株中紅景天苷的量只有0.5％-0.8％。人工栽培的紅景天成本高而有效成分量低，達不到市場要求的標準，因而植物提取正面臨嚴峻的現實。除植物提取外，化學合成、微生物轉化及組織培養生產紅景天苷也是研究熱點。

明海泉以酪醇和溴代四乙酰葡萄糖為原料，以Ag₂CO₃為催化劑，成功合成了紅景天甙(明海泉，紅景天甙合成及藥理作用，藥學通訊，1986，21(6):373)。王夢亮等以D-葡萄糖和酪醇為底物，探索出了一種借助于微生物合成紅景天甙的方法(王夢亮，張芳，劉滇生，微生物催化D-葡萄糖與酪醇葡糖基轉移合成紅景天甙的初步研究，催化學報，2006，27(3):233-236)。

在采用組織培養方式進行紅景天苷的生物合成方面，研究成果最為成熟的是Wu等用致密愈傷組織體系進行的紅景天苷高產出率培養條件的研究。從高山紅景天的根、莖、葉、子葉等分離體得到的相應的幾種愈傷組織，并對其生長速度、紅景天苷量和培養繁殖條件進行篩選，確定了生成高產出率紅景天苷的最佳條件，紅景天苷最高收獲率可達到干重57.72mg/g，為野生植株的5～10倍(Wu S,Zu Y,Wu M High yield production of salidroside in the suspension culture of Rhodiola sachalinensis.J Biotechnol,2003,106(1):331)。

化學合成紅景天苷工藝過程長不易操作控制，成本高，難以實現產業化；微生物轉化天麻素、紅景天苷效率較低，需要添加外源底物；植物組織培養反應周期長，效價較低。因此，紅景天苷的微生物體內生物全合成途徑具有重要的科研價值及社會效益。本實驗室構建了合成紅景天苷的工程大腸桿菌，實現了紅景天苷的微生物發酵生產，并申請了中國專利，專利名稱為一種高產酪醇和/或紅景天苷和淫羊藿次苷D2的大腸桿菌表達菌株及其應用，公開號為CN 104946575 A。目前從大腸桿菌發酵液中分離純化紅景天苷的方法尚未見報道。

大孔吸附樹脂是20世紀60年代發展起來的一種新型非離子型高分子聚合物，兼有吸附性和篩選性，是以吸附作用和篩選作用相結合的分離材料。大孔吸附樹脂理化性質穩定，不溶于酸、堿及有機溶劑,對有機物選擇性好,不受無機鹽等離子和低分子化合物的影響。目前,大孔吸附樹脂主要應用于環保、醫藥工業、化學工業、分析化學、臨床鑒定等多個領域，特別是在抗生素，皂苷，生物堿等天然產物的提取純化過程中應用越來越廣泛(郭麗冰，王蕾，常用大孔吸附樹脂的主要參數和應用情況，中國現代中藥，2006，8(4):26-32)。

目前，使用大孔吸附樹脂提取純化微生物發酵液中紅景天苷的方法尚未報道。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種使用大孔吸附樹脂提取純化發酵液中紅景天苷的方法。

本發明的技術方案概述如下：

一種使用大孔吸附樹脂提取純化發酵液中紅景天苷的方法，包括以下步驟：