[發明專利]胱硫醚β-裂解修飾酶的制備方法及含胱硫醚β-裂解修飾酶試劑盒

有效

• 申請號: 201610642923.6
• 申請日: 2016-08-08
• 公開（公告）號: CN106282147B
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 李偉奇;李杰;房君江;張秀文;林清玉
• 申請（專利權）人: 上海睿康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/80
• 分類號: C12N9/80;C12Q1/527;C12Q1/32
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種對胱硫醚β-裂解酶進行修飾的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：去除胱硫醚β-裂解酶功能性氨基酸鏈中的Cys的氨基酸側鏈的巰基，得到胱硫醚β-裂解酶非功能性氨基酸鏈；所述去除試劑為N-(1-芘)馬來酰亞胺、甲氧基聚乙二醇馬來酰亞胺、聚乙二醇甲醚馬來酰亞胺中的一種或幾種的混合,具體為，將胱硫醚β-裂解酶與去除試劑進行連接，胱硫醚β-裂解酶側鏈中的-SH基團被馬來酰亞胺基團取代；

S2：用彈性蛋白酶切除所述胱硫醚β-裂解酶非功能性氨基酸鏈中的12個氨基酸，完成修飾,具體為，將步驟S1中修飾后的胱硫醚β-裂解酶與彈性蛋白酶進行水解，彈性蛋白酶與非功能性氨基酸鏈中Lys的C端發生反應，水解去除Lys之后的12個氨基酸。

2.一種由權利要求1所述的方法得到的胱硫醚β-裂解修飾酶。

3.一種含有權利要求2所述的胱硫醚β-裂解修飾酶的試劑盒，包括試劑R1和試劑R2，其特征在于，所述試劑R2包含有按下列濃度計的各組分：

所述試劑R1包含有按下列濃度計的各組分：

4.如權利要求3所述的胱硫醚β-裂解修飾酶的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1和試劑R2中的緩沖液均為Good’s緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、HEPES緩沖液、MES緩沖液中的一種或幾種；試劑R1和試劑R2中的緩沖液的PH均為6.0～8.0。

5.如權利要求3所述的胱硫醚β-裂解修飾酶的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1和試劑R2中的表面活性劑均為吐溫20、吐溫80、曲拉通-100、十二烷基苯磺酸鈉中的一種或幾種。

6.如權利要求3所述的胱硫醚β-裂解修飾酶的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1和試劑R2中的穩定劑均為牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、螯合劑EDTA類中的一種。

7.如權利要求3所述的胱硫醚β-裂解修飾酶的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1和試劑R2中的防腐劑均為疊氮鈉或proclin系列防腐劑。