[發明專利]新的副溶血性弧菌噬菌體及其組合物、制備方法和應用

有效

• 申請號: 201610640239.4
• 申請日: 2016-08-05
• 公開（公告）號: CN107686832B
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 喬歡;徐旭凌;黃杰;伏艷美;周思翔;王衛斌;熊劍勝;霍茨蒙德·曼德維爾;許文建;閆杰;張歡歡;叢郁;沈嬋娟
• 申請（專利權）人: 菲吉樂科（南京）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K35/76;A61P31/04
• 代理公司: 北京市隆安律師事務所 11323
• 代理人: 劉東方

本發明涉及微生物技術領域，提供了新的副溶血性弧菌噬菌體及其組合物、制備方法和應用，具體包括副溶血性弧菌噬菌體VP46，保藏編號CCTCC NO：M2016290；副溶血性弧菌噬菌體VP48，保藏編號CCTCC NO：M2016291；或副溶血性弧菌噬菌體VP7，保藏編號CCTCC NO：M2016289。該噬菌體為嚴格烈性噬菌體且對宿主菌具有高毒性，宿主范圍較廣，低濃度下對宿主菌具有高毒性；所述噬菌體的DNA無法編碼可能引起潛在健康風險的蛋白；且于培養液中室溫下穩定存活，4℃下超過12個月；在非致病性細菌宿主上可較好增殖；可實現大規模工業生產。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及新的副溶血性弧菌噬菌體性、其組合物以及它們的制備方法和應用。

背景技術

南美白對蝦是當前世界養殖產量最高的甲殼類養殖品種，其適鹽度廣、生長迅速、出肉率高，于我國沿海及內陸地區得到大范圍養殖。2012年我國南美白對蝦養殖總產量達145萬噸，占對蝦養殖產量85％，產值超過300億元，是單一品種總產量和產值最高的甲殼類養殖品種。但近年來全球南美白對蝦急性肝胰腺壞死綜合征(Acute HepatopancreaticNecrosis Syndrome，AHPNS)的爆發使其養殖業遭受重創。AHPNS最早發生于2009年，該病由美國亞利桑那大學Lightener教授于2011年首次報道，Lightner(2011)發現AHPNS病原為一種罕見的副溶血性弧菌，Lightner(2013)與羅竹芳(2013)均證實AHPNS由攜帶PirA、PirB基因的副溶血性弧菌引起，對蝦感染該病原菌后表現出生長緩慢、螺旋式游動、體色發白、肝胰腺腫大且褪色，部分蝦還出現明顯的肝胰腺萎縮。目前除印度與印尼外，東南亞各主要對蝦養殖國均受到AHPNS的侵染：馬來西亞2011年對蝦產量減少約3萬噸；越南2011年對蝦受感染養殖面積達9.0萬公頃；最大的南美白對蝦生產國-中國，產量由2013的153萬噸下降到2014年的130萬噸左右，同時于2013年從對蝦凈出口國變為對蝦凈進口國。AHPNS爆發后，蝦塘排塘率高達80％以上，養殖成功率不足20％。養殖戶損失慘重，許多蝦農改養其他養殖品種，南美白對蝦養殖面積逐年減少，AHPNS困擾著全球對蝦的養殖。

目前主要通過抗生素、消毒劑、微生物制劑等藥物對AHPNS進行防治，但隨著養殖過程中各類抗生素的濫用使得副溶血性弧菌大量出現耐藥株，甚至是多重耐藥株；而且隨著多種新型抗生素的出現，副溶血性弧菌的耐藥譜在不斷擴展，目前許多菌株均對阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻吩、氨芐西林、青霉素等抗生素耐藥。吳蓓蓓等人(《中國人獸共患病學報》，2011,27(5)381-385)發現寧波地區海產品中82％以上的分離菌株可耐受6種以上抗生素；寫臘月等人(《海洋漁業》2011,33(4)442-446)測定來自上海、江蘇、海南等地海水養殖區域內的副溶血性弧菌耐藥性后發現其80％以上對3種以上抗生素耐藥，說明水產養殖中副溶血性弧菌耐藥性已十分嚴重。抗生素等藥物的大量使用，還造成了對蝦體內含有殘留的抗生素類物質，人長時間攝入該類食品后，易導致抗生素類物質蓄積在人體內，引起各種組織器官病變甚至癌變。

水產養殖中抗生素的濫用已成為當前漁業細菌性疾病防控的突出問題。病原菌耐藥菌株的出現不僅對經濟造成損失、而且也極大威脅著人類健康、克服細菌耐藥性已成為目前的關注重點。

噬菌體是專門裂解細菌的一類病毒，主要化學成分由蛋白質和核酸組成，廣泛存在于土壤、空氣、水及生物體中，具有較強的專一性。由于其具備強大的殺菌能力，噬菌體可作為一種抗細菌感染制劑使用，自20世紀初以來一直受到國內外許多學者關注。寧淑香等人(《水產科學》2000,19(2)14-16)自海水中分離噬菌體并對其特性進行了初步研究。藺紅蘋等人(《水產科學》2010,29(5)291-294)將噬菌體投入對蝦養殖水體中觀測其防治效果，結果發現噬菌體可有效清除水體中副溶血性弧菌。丁云娟(《中國海洋大學碩士學位論文》2012)發現副溶血性弧菌噬菌體qdvp001可對牡蠣體內副溶血性弧菌具有一定凈化作用。彭勇(《中國海洋大學碩士學位論文》2013)發現了副溶血性弧菌噬菌體VPp1、VPp2、VPp3僅可識別12株供試副溶血性弧菌中的3株，其裂解率為25％。