[發明專利]CD61作為生血內皮細胞標志物的用途

有效

• 申請號: 201610631439.3
• 申請日: 2016-08-01
• 公開（公告）號: CN106226535B
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 潘光錦;黃可;杜鵑;劉兵;高嬌;廖寶劍
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;C07K14/705
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙)11201
• 代理人: 李志東

技術領域

本發明涉及生物領域，具體地，本發明涉及生物標記物，更具體地，本發明涉及CD61作為生血內皮細胞標志物的用途、用于檢測生血內皮細胞的試劑盒、鑒定生血內皮細胞的方法。

背景技術

從人的多潛能干細胞(pluripotent stem cells；PSCs)，包括胚胎干細胞(embryonic stem cells；ESCs)以及誘導多能干細胞(induced pluripotent stem cell；iPSCs)，分化獲得造血干/前體細胞(hematopoietic stem/progenitor cells；HS/PCs)，具有十分重要的應用前景。然而，目前在體外分化獲得的HPC不具有造血重建能力。因此，有必要詳細地解析HPC的生成機制，從而助力于在體外從PSCs到HPCs的分化研究。

在胚胎發育過程中，造血干細胞是從生血內皮(hemogenic endothelium；HE)轉變過來的；而這個轉變的過程被稱為內皮向造血轉變(endothelial to hematopoietic transition；EHT)。生血內皮可以進一步分化，變成HPC；而非生血內皮不具備這種能力。通過精確地解析HE及EHT有助于在體外優化HPC的分化方法。

通常認為,HE存在于CD34+CD31+/CD144+的內皮細胞中，但難以將生血內皮和非生血內皮區分開來；目前只有一例報道，認為CD73具有區分功能，且CD73+的細胞不具有造血功能。但是尚不能判斷CD73-的細胞是否都是HE。

因此，在造血分化過程中，如何精確地界定生血內皮(HE)還有待進一步研究。

發明內容

本申請是基于發明人對以下事實和問題的發現和認識作出的：

發明人通過大量的實驗研究生血內皮和非生血內皮差異表達的表面標記分子的過程中，發現CD61是生血內皮細胞的特異性表面標記分子。基于此發現，發明人提出了CD61表面標記分子在精確界定生血內皮細胞中的用途。

在本發明的第一方面，本發明提出了一種用于檢測生血內皮細胞的試劑盒。根據本發明的實施例，所述試劑盒包括特異性識別CD61的試劑。本發明實施例的試劑盒，能夠快速、簡便、精確地鑒定生血內皮細胞。

根據本發明的實施例，上述檢測生血內皮細胞的試劑盒還可以進一步具有如下附加技 術特征至少之一：

根據本發明的實施例，所述試劑包括選自特異性識別CD61蛋白的抗體、特異性識別CD61 mRNA的探針的至少之一。特異性識別CD61蛋白的抗體可特異性識別CD61抗原位點，特異性識別CD61 mRNA的探針可通過序列的特意性靶向結合CD61 mRNA的序列位點，進而不論是通過抗原抗體的特異性結合還是通過核苷酸序列的特異性互補配對，所述試劑包括特異性識別CD61 mRNA的探針或特異性識別CD61 mRNA的探針進一步提高了本發明試劑盒對生血內皮細胞的檢測的靈敏性和準確性。

在本發明的第二方面，本發明提出了特異性識別CD61的試劑在制備試劑盒中的用途，所述試劑盒用于檢測生血內皮細胞。發明人發現，CD61在生血內皮細胞中特異性表達，是生血內皮細胞的特異性表面標志物，進而特異性識別CD61的試劑適合制備檢測生血內皮細胞的試劑盒，該試劑盒用于檢測生血內皮細胞具有準確度和靈敏度高的特點。

根據本發明的實施例，上述特異性識別CD61的試劑在制備試劑盒中的用途還可以進一步包括如下附加技術特征至少之一：

根據本發明的實施例，所述試劑包括選自特異性識別CD61蛋白的抗體、特異性識別CD61 mRNA的探針的至少之一。所述試劑不論是通過抗原抗體的特異性結合還是通過核苷酸序列的特異性互補配對特異性識別CD61，均使得所述試劑更加適合用于制備檢測生血內皮細胞的試劑盒，該試劑盒的準確度和靈敏度進一步提高。

在本發明的第三方面，本發明提出了CD61作為生血內皮細胞標志物的用途。發明人通過大量的實驗發現，在生血內皮分化過程中，CD61在生血內皮細胞中特異性表達，進而發明人提出，CD61可作為生血內皮細胞的標志物，即在造血分化過程中，表達CD61的內皮細胞是生血內皮細胞，具有分化為造血前體細胞的潛能。

在本發明的第四方面，本發明提出了一種生血內皮細胞標志物，根據本發明的實施例，所述生血內皮細胞標志物具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。