[發明專利]檢測腫瘤標志物的流式檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610622074.8
• 申請日: 2016-08-02
• 公開（公告）號: CN107290537A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 郭馳;杜朝陽;張小俊
• 申請（專利權）人: 北京金沐醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N15/14
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李進

技術領域

本發明涉及生物醫學檢測領域，具體而言，涉及一種檢測腫瘤標志物的流式檢測試劑盒。

背景技術

單核-巨噬細胞包括骨髓中的前單核細胞、外周血中的單核細胞、以及組織內的巨噬細胞。人類外周血細胞主要分為無核細胞(主要為血紅細胞)和有核細胞(白細胞等)。單核細胞約占有核細胞總數的5％左右，由髓系造血祖細胞分化而來，是免疫系統中抗原遞呈細胞(APC細胞)的重要組分。

在人體外周循環血液中，白細胞分布在兩個地方，即循環池和儲存池，循環池就是流動血液中的白細胞，儲存池就是附著在血管壁，淋巴結，骨髓等處的白細胞，暫時不參與血液循環，但儲存池中的白細胞與循環池中的白細胞保持動態平衡。白細胞在人體循環系統內成熟分化并實現免疫學功能可以大致分為以下步驟：毛細血管中的單核細胞→透過血管壁進入血管外組織→發現異源性物質(細菌、病原體、腫瘤細胞等)→分化為成熟的巨噬細胞→吞噬并消化→將抗原遞呈到特定的細胞表面分子上→經由淋巴管回流到外周血→完成抗原遞呈激活殺傷性免疫細胞。

作為機體抗擊外來病原侵襲和清楚自身非正常細胞機制的哨兵，巨噬細胞是免疫系統形成免疫應答的重要環節，作用重大。在正常人體內每時每刻都有向著腫瘤化(永生化、非正常凋亡)發展的細胞產生，正常的機體免疫機制可以通過上述過程，將其及時清除。由此可見無論健康人群還是癌癥患者體內巨噬細胞對于腫瘤化細胞的吞噬作用，都是無時無刻不在進行的，針對單核-巨噬細胞內腫瘤來源物質(包括蛋白質、核算、脂類等)的觀測，可以為我們提供一個監控體內腫瘤發生、發展的嶄新視角，其應用前景必然非常廣泛。

單核-巨噬細胞作為有核細胞的重要組分，實驗室一般是通過其表面抗原分子CD14和CD16進行檢測的，目前可以買到成熟的抗體。主要的臨床應用集中在血細胞組成檢測和造血系統腫瘤(如：粒/單核細胞性白血病)方面的檢測中，為臨床診斷提供重要參考。但將其與實體腫瘤的監控相聯系，就目前專利和文獻檢索來看，仍然缺少足夠多的系統性的相關研究，且尚未形成成熟產品，在中國大陸地區也沒有相關專利授權。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測腫瘤標志物的流式檢測試劑盒，以解決上述問題。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種檢測腫瘤標志物的流式檢測試劑盒，包括用以標記細胞膜表面抗原的CD14抗體和CD16抗體，以及用以標記胞漿內部抗原的抗體；

所述胞漿內部抗原為TKTL1和/或DNASE1L1。

本發明的原理為，用CD14和CD16的抗體標記出待檢測對象外周血中的CD14⁺CD16⁺細胞，去除除白細胞之外的大部分雜質后用待檢測的抗腫瘤標志物X(即上述的胞漿內部抗原)的抗體標記該腫瘤標志物；

用流式細胞儀檢測X⁺CD14⁺CD16⁺細胞與CD14⁺CD16⁺的細胞數量并統計前者與后者細胞數量的比值。

流式細胞術(Flow Cytometry，FCM)是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數。通過使用流式細胞術對CD14⁺CD16⁺及X⁺CD14⁺CD16⁺陽性細胞的數量進行檢測，可以快速、精度地評價全局腫瘤標志物表達水平。

目前已經確定人類外周血中存在不同亞型的單核細胞。已知的主要根據CD14和CD16抗原的表達分為4個亞型：CD14⁺⁺CD16^－(G1亞型)，CD14⁺⁺CD16⁺(G2亞型)，CD14⁺CD16^－(G3亞型)，CD14⁺CD16⁺(G4亞型)。CD14⁺CD16⁺是其中最主要的亞型之一，其比其他亞型的單核細胞具有更強的吞噬能力，因而從本發明的原理角度來講，檢測CD14⁺CD16⁺亞型的單核細胞更有意義。