[發明專利]一種同時檢測人全血中4類乙醇非氧化代謝物的方法

有效

• 申請號: 201610620522.0
• 申請日: 2016-07-31
• 公開（公告）號: CN107664664B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 饒渝蘭;林澤彬;張馨予;李椒綸;黃志斌;沈憶文;趙子琴
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種同時檢測人全血中4類乙醇非氧化代謝物的方法，其特征在于，采用液相色譜－質譜聯用法對人全血中4類共10種乙醇非氧化代謝物進行定性和定量分析，其主要包括下述步驟：

(1)血液樣品預處理

取人全血檢材50μL于2mL微量離心管中，加入內標混合溶液10μL，再加入混合提取溶劑冰80/20丙酮-乙腈400μL，渦旋混合5min，12000rpm離心10min，轉移上清液100μL于進樣小瓶中，進樣5μL；

(2)采用液相色譜－質譜聯用法測定全血中4類共10種乙醇非氧化代謝物的濃度；采用的色譜柱為Thermo Hypersil Gold C18柱，規格為2.1mm×100mm,1.9μm，柱溫47℃；流動相A相為：5％乙腈-水；B相為：90％甲醇-水，并含有0.1％的甲酸；C相為：含有0.1％甲酸的甲醇；D相為：含有5mM醋酸銨的異丙醇，采用如表1所示的梯度洗脫程序及條件，

表1

流速0.2mL/min；采用的質譜條件為：ESI；噴霧電壓：正離子模式時為3.6kV，負離子模式時為2.8kV；鞘氣：35Arb；輔助氣：10Arb；離子傳輸管溫度：350℃；脫溶劑溫度：300℃；掃描方式：多反應監測；

檢測目標物的色譜保留時間和質譜參數如表2所示；

表2

所述的人全血4類共10種乙醇非氧化代謝物為乙基葡萄糖醛酸酯EtG、乙基硫酸酯EtS、十四酸乙酯E14：0、十六酸乙酯E16：0、十八酸乙酯E18：0、油酸乙酯E18：1、亞油酸乙酯E18：2、花生四烯酸乙酯E20：4、2種磷脂酰乙醇PEth-16：0/18：1和PEth-18：1/18：1。