[發(fā)明專利]一種采用生物反應器生產山參培養(yǎng)根的方法有效

申請?zhí)枺?/td>	201610592050.2	申請日：	2016-07-26
公開（公告）號：	CN107646674B	公開（公告）日：	2020-06-16
發(fā)明（設計）人：	侯劍英;王曉東;莊欠民	申請（專利權）人：	遼寧未來生物科技有限公司
主分類號：	A01H4/00	分類號：	A01H4/00
代理公司：	沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002	代理人：	馬馳
地址：	117000 遼寧***	國省代碼：	遼寧;21
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種采用生物反應器生產培養(yǎng) 方法
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【權利要求書】：

1.一種采用生物反應器生產山參培養(yǎng)根的方法，其特征在于：將新鮮的山參切塊后誘導培養(yǎng)為外植體愈傷組織，再從該愈傷組織誘導生長出不定根組織——稱之為山參培養(yǎng)根，三角瓶培養(yǎng)后又接種至氣升式生物反應器中，在所需溫度和通氣控制范圍內，在液體培養(yǎng)基中快速生長繁殖，針對山參培養(yǎng)根的生長過程添加了生長促進劑和人參皂甙生成誘導劑，山參培養(yǎng)根在生物反應器內培養(yǎng)結束后，再經清洗、浸泡、干燥，最后獲得大量山參培養(yǎng)根成品；

具體的步驟為：

（1）山參培養(yǎng)根在含有蔗糖和IBA(吲哚丁酸)的100~120mL優(yōu)化過的SCHENK HIDEBRANDT (SH)液體培養(yǎng)基的三角瓶內震蕩擴增培養(yǎng)，溫度為16~26℃溫度范圍，時間為32~40天，至山參培養(yǎng)根充滿整個三角瓶；

（2）經三角瓶培養(yǎng)得到的山參培養(yǎng)根后，收集瓶內的山參培養(yǎng)根，無菌接種到裝有12~14升含有蔗糖和IBA(吲哚丁酸)的優(yōu)化過的SCHENK HIDEBRANDT (SH)液體培養(yǎng)基并滅菌后的氣升式生物反應器內；

山參培養(yǎng)根在氣升式生物反應器中培養(yǎng)的前28天內，培養(yǎng)溫度控制范圍在23～26℃，空氣通氣量控制范圍在0.09～0.21 m³/h；在29天至結束培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度范圍調整為19～21℃，空氣通氣量范圍調整為0.012～0. 024 m³/h；其中分別在第29天添加人參皂甙生成誘導劑，第35天添加生長促進劑；

（3）山參培養(yǎng)根在氣升式生物反應器內生長至山參培養(yǎng)根長出新的根須充滿氣升式生物反應器，培養(yǎng)結束，將須狀山參培養(yǎng)根收集后，用清水沖洗干凈、浸泡5~10分鐘去除殘留培養(yǎng)基，再經80~90℃通風干燥20~24小時即獲得山參培養(yǎng)根成品；

于步驟（2）中，第29天加入人參皂甙生成誘導劑，每12-14升的液體培養(yǎng)基中添加人參皂甙生成誘導劑，所述人參皂甙生成誘導劑為500mL含有終濃度為50～100ppm的水楊酸，50～100μmol/L的亞麻酸，200~400ppm的透明質酸，200~400ppm的海藻多糖，摩爾濃度0.05~0.1%的聚乙二醇400的SCHENK HIDEBRANDT (SH)標準培養(yǎng)基中得到的人參皂甙生成誘導劑; 。

步驟（2）中，第35天加入生長促進劑，每12-14升的培養(yǎng)體系中添加生長促進劑，所述的生長促進劑為終濃度為200～400ppm生物素，10～16wt%的蔗糖，溶入體積為500mL的磷酸鉀緩沖液中得到的生長促進劑，pH控制在5.8～6.0,其中鉀離子濃度為0.5～2.0 mmol/；

山參培養(yǎng)根培養(yǎng)過程所使用的優(yōu)化過的培養(yǎng)基為SCHENK HIDEBRANDT (SH) 液體培養(yǎng)基的改良培養(yǎng)基，所有優(yōu)化過的SCHENK HIDEBRANDT (SH)液體培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的濃度為SCHENK HIDEBRANDT (SH)標準液體培養(yǎng)基的0.7～0.8倍，每升SCHENK HIDEBRANDT(SH)標準液體培養(yǎng)基的成分有2500mg KNO₃，300mg NH₄H₂PO₄，151.02mg CaCl₂，195.34mgMgSO₄，10.0mg MnSO₄·H₂O，1.0mg KI，0.10 mg NaMoO₄·2H₂O，1.0mg ZnSO₄·7H₂O，0.20mgCuSO₄·5H₂O，15.0mg FeSO₄·7H₂O，20.0mg Na₂EDTA，1000 mg myo-inositol，5.0mgThiamine-HCl，0.50mg Pyridoxine-HCl，5.0mg Nicotinic-acid；山參培養(yǎng)根培養(yǎng)過程pH控制在5.7～5.9。