[發明專利]高速逆流色譜快速分離制備天然二氫黃酮類化合物的方法

有效

• 申請號: 201610585654.4
• 申請日: 2016-07-24
• 公開（公告）號: CN107652260B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 孫仲琳;何建明;穆青;藍江兒
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07D311/32
• 分類號: C07D311/32;C07D311/40;C07D493/04;C07H17/04;C07H1/06
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發明屬醫藥技術領域，涉及分離制備天然二氫黃酮類化合物的方法，本方法采用高速逆流色譜連續循環方法，以正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水形成的高速逆流色譜的兩相溶劑體系從苦豆子根中分離制備二氫黃酮類化合物。本方法中同時采用高速逆流循環洗脫模式、在線存儲技術以及逆向洗脫模式，將含有目標化合物的流份進行連續的循環洗脫，收集流份，得到純度大于95％黃酮類化合物Sophoratonkin，Alopecurone F，Lehmannin，Alopecurone A，Sophora flavanone G和Alopecurone B。本發明方法一次性分離得到高純度的五個二氫黃酮類化合物以及紫檀素苷，操作方法簡便、快速，分離過程沒有因材料吸附導致的目標成分損失。

技術領域

本發明屬醫藥技術領域，涉及分離制備天然二氫黃酮類化合物的方法，具體涉及采用高速逆流色譜(HSCCC)連續循環分離法制備二氫黃酮類化合物。

背景技術

現有技術公開了苦豆子(Sophora alopecuroides L.)為豆科槐屬多年生草本植物，別名苦豆草，在我國西北地區為常用中藥材，其根、莖、全草及種子皆可入藥。苦豆子味苦性寒，具有祛風燥濕、清熱解毒、止痛殺蟲等作用。藥理學研究表明，從苦豆子中分離所得多種類型化合物具有抗腫瘤、免疫調節、抗毒素、治療乙型肝炎等藥理作用，已有開發成為臨床藥物。化學成分研究表明，苦豆子含有多種化學成分,除生物堿類成分外，另有黃酮類、有機酸、氨基酸、揮發油、蛋白質和多糖類成分；所述類型各異的化學成分導致植物苦豆子的多種藥理活性，黃酮類化合物包括二氫黃酮類是所述成分中的一類；由于多種不同的藥理活性使得苦豆子成為用途廣泛的藥用植物，但是，苦豆子中類型不同的化合物所具有的不同類型的藥理作用也使得它作為藥材使用時產生藥效不明確的問題，如，曾經作為臨床用藥的苦豆草片便由于上述原因于20世紀90年代后期停止生產。因此采用特定方法對苦豆子藥材中成分進行分離對于這一藥材的使用具有重要意義。

高速逆流色譜(HSCCC)是一種連續的液-液分配色譜分離技術，這種分離技術的固定相和流動相均為液體，因此樣品在分離應用過程中不發生不可逆吸附，具有無損失的特點。若分離條件選擇適當，可以高效、快速、以及較大量分離制備植物化學成分。已有文獻報道利用常規HSCCC技術從花生殼中分離純化得到黃酮類化合物，如香葉木素、木犀草素、5,7-二羥基色原酮等(牛丹丹等,天然產物研究與開發,2011,23:110-113)，但常規HSCCC方法耗時較長且分離的化合物結構較為單一，對于苦豆子，很難快速同時一次性分離得到較高純度的、結構復雜而且相近的單體黃酮類化合物。

基于已有技術的現狀，本申請的發明人擬提供一種用高速逆流色譜的快速高效分離制備天然二氫黃酮類化合物的方法，該方法中同時組合利用HSCCC連續循環洗脫模式、在線儲存技術和逆向洗脫模式，能快速高效一次性從苦豆子植物提取物中分離純化得到多個高純度、結構復雜的二氫黃酮類化合物。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速、高效分、無損耗分離制備高純度二氫黃酮類化合物的方法，具體涉及一種高速逆流色譜快速分離制備天然二氫黃酮類化合物的方法。該方法中同時組合利用HSCCC連續循環洗脫模式、在線儲存技術以及逆向洗脫模式，快速高效地同時從植物提取物中分離純化得到多個高純度、復雜結構二氫黃酮化合物。

具體的，本發明的高速逆流色譜快速分離制備天然二氫黃酮類化合物的方法，其包括步驟：

(1)設定高速逆流色譜儀參數；

(2)測算并設置分離制備條件；

(3)將含有二氫黃酮類化合物的苦豆子根的乙醇提提取物樣品溶于兩相體系中；通過進樣閥將樣品注入色譜柱內；

(4)同時組合利用循環分離模式、在線存儲技術和逆向洗脫模式進行分離；

(5)收集高純度的含有目標二氫黃酮化合物的流份；

(6)合并回收含有相同的二氫黃酮類化合物的流份，濃縮蒸干，得到苦豆子二氫黃酮類化合物。