[發明專利]納米纖維基底及其制備方法、納米纖維基底的應用在審

申請號：	201610584450.9	申請日：	2016-07-22
公開（公告）號：	CN107641618A	公開（公告）日：	2018-01-30
發明（設計）人：	裴仁軍;孫娜	申請（專利權）人：	中國科學院蘇州納米技術與納米仿生研究所
主分類號：	C12N5/09	分類號：	C12N5/09;B82Y30/00;D01D5/00;D06M13/463;D06M101/16
代理公司：	深圳市銘粵知識產權代理有限公司44304	代理人：	孫偉峰,武岑飛
地址：	215123 江蘇省***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	納米纖維基底及其制備方法應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及生物醫學材料技術領域，具體是一種納米纖維基底及其制備方法和納米纖維基底在CTC捕獲和釋放方面的應用。

背景技術

CTC(circulating tumor cell)是循環腫瘤細胞的簡稱。循環腫瘤細胞是存在于外周血中的各類腫瘤細胞的統稱，因自發或診療操作從實體腫瘤病灶(原發灶、轉移灶)脫落，大部分CTC在進入外周血后發生凋亡或被吞噬，少數能夠逃逸并發展成為轉移灶，增加惡性腫瘤患者死亡風險，它是絕大多數惡性腫瘤患者在術后出現遠處轉移和術后復發的主要原因。研究表明血液中CTC數目與癌癥患者病情發展息息相關，因此監測血液中CTC數目對于評估癌癥轉移和療效十分重要。另外，CTC分子水平分析可以提供許多臨床相關的重要信息，有效指導臨床治療。

對CTC進行分子鑒定和功能分析時要求CTC樣品具有高純度、高活性的特點。雖然目前已有一些CTC富集技術出現，但是由于待捕獲樣品經分離后仍具有較多數量的血細胞，因此捕獲CTC的純度一般都不太高。此外，在捕獲CTC后，由于已捕獲細胞不僅與基底發生特異性結合，還會發生非特異性結合，導致CTC釋放時有部分細胞損失，難以保持較高的生物活性。因此，如何優化用于CTC捕獲和釋放的基底，以提高CTC的純度和生物活性，是亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種納米纖維基底及其制備方法、以及所述納米纖維基底在CTC捕獲和釋放方面的應用，以解決捕獲CTC的純度和生物活性較低等問題。

為了解決上述問題，本發明包括三個方面。

第一個方面，本發明提供一種納米纖維基底，用于CTC捕獲與無損釋放，所述納米纖維基底包括依次連接的襯底、納米結構層、抗粘附分子層以及親和捕獲分子層。

進一步地，所述襯底為玻璃襯底、石英襯底、聚二甲基硅氧烷襯底或硅片襯底中的一種或幾種的結合；所述納米結構層由通過靜電紡絲工藝沉積在所述襯底上的殼聚糖納米纖維構成；所述抗粘附分子層由接枝在所述殼聚糖納米纖維表面的羧基甜菜堿分子刷構成；所述親和捕獲分子層由偶聯在所述抗粘附分子層上的靶細胞親和捕獲分子構成。

優選地，所述納米結構層是由直徑為100～500nm的殼聚糖納米纖維堆積而成。

在本發明中，靶細胞為上皮蛋白過表達的循環腫瘤細胞；所述靶細胞親和捕獲分子為基于靶細胞粘附蛋白篩選的特異性適配體或者所述特異性適配體的修飾化產物。

進一步地，所述納米纖維基底還包括捕獲分子互補鏈，所述捕獲分子互補鏈為所述靶細胞親和捕獲分子的互補鏈。

第二個方面，本發明提供一種納米纖維基底的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：準備一襯底；

步驟二：在所述襯底上沉積納米結構層；

步驟三：在所述納米結構層上接枝抗粘附分子層；

步驟四：在所述抗粘附分子層上連接親和捕獲分子層。

優選地，所述納米結構層是由直徑為100～500nm的殼聚糖納米纖維堆積而成。

進一步地，所述納米纖維基底還包括捕獲分子互補鏈，所述捕獲分子互補鏈為所述靶細胞親和捕獲分子的互補鏈。

【具體步驟】進一步地，所述步驟二包括：通過靜電紡絲工藝將含有殼聚糖聚合物的電紡溶液噴射紡絲在所述襯底上，形成沉積在所述襯底上的所述納米結構層；和/或

所述步驟三包括：將所述步驟二得到的連接有所述納米結構層的所述襯底在含有三乙胺的二氯甲烷和溴代異丁酰溴的混合溶液中進行反應，得到CNFs-Br；并將所述CNFs-Br置于三蒸水、甲醇、CBMA、PMDETA和溴化亞銅混合的反應液中進行反應，得到接枝在所述納米結構層上的所述抗粘附分子層；和/或