[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定表達(dá)豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的重組細(xì)胞系、疫苗和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610573424.6
• 申請(qǐng)日: 2016-07-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107619819A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李安迪;高永新;顏仁和;王升堯;劉軍;李紅衛(wèi)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州伯尼茲生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/86;A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 廣州市深研專利事務(wù)所44229
• 代理人: 姜若天

1.一種穩(wěn)定表達(dá)豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的重組細(xì)胞系，其特征在于該重組細(xì)胞系是由如下方法制備而得：

步驟1：

構(gòu)建慢病毒重組載體，該慢病毒重組載體包括編碼豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的基因序列，所述編碼豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示；

步驟2：

將所述慢病毒重組載體與慢病毒包裝輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染人胚胎腎細(xì)胞HEK-293T，進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn)，收集病毒液；

步驟3：

用上述病毒液感染人胚胎腎細(xì)胞HEK-293T后培養(yǎng)，將培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行稀釋克隆，收集克隆細(xì)胞培養(yǎng)上清液與細(xì)胞，檢測(cè)并比較豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的表達(dá)量，獲得穩(wěn)定表達(dá)豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的重組細(xì)胞系。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述穩(wěn)定表達(dá)豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的重組細(xì)胞系，其特征在于所述編碼豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.權(quán)利要求1所述穩(wěn)定表達(dá)豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的重組細(xì)胞系在制備預(yù)防豬流行性腹瀉病毒疫苗藥物中的應(yīng)用。

4.一種豬流行性腹瀉病毒亞單位疫苗的制備方法，其特征在于該制備方法包括如下步驟：

步驟1：

將權(quán)利要求1所述重組細(xì)胞系正常傳代后長(zhǎng)至融合度達(dá)到90%以上時(shí)，換無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4d；收集培養(yǎng)上清經(jīng)2000rpm離心10min，吸取上清液，該上清液即為疫苗抗原液；

步驟2：

將步驟1制備的疫苗抗原液與佐劑按1：1~1：3重量比進(jìn)行乳化，則制備得到所需豬流行性腹瀉病毒亞單位疫苗。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述佐劑為礦物油佐劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述乳化溫度為30℃，乳化轉(zhuǎn)速為350轉(zhuǎn)/分鐘，乳化時(shí)間為5min。

7.一種豬流行性腹瀉病毒亞單位疫苗，其特征在于該疫苗是由權(quán)利要求4-6所述任一項(xiàng)制備方法制備得到的。