[發明專利]一種南極磷蝦非酚性弱堿性生物堿的提取純化及檢測方法

有效

• 申請號: 201610570477.2
• 申請日: 2016-07-19
• 公開（公告）號: CN106279181B
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 王翩翩;劉代成
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: C07D487/04
• 分類號: C07D487/04;G01N30/02
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司37221
• 代理人: 董潔

技術領域

本發明涉及一種南極磷蝦非酚性弱堿性生物堿的提取純化及檢測方法，屬食品、藥品和化工領域。

背景技術

南極磷蝦(Euphausia superba Dana)因其生物儲量巨大，含有豐富的天然活性物質，廣泛被人們關注。近年來，關于南極磷蝦的研究越來越熱。南極磷蝦的開發主要集中于南極磷蝦剝殼工藝、脫氟技術和營養及活性成分的研究等方面。南極磷蝦蛋白、酶、脂類、蝦青素、甲殼素等均已有不同程度的研究進展。隨著南極磷蝦研究的深入，南極磷蝦產品也由初級的飼料蝦粉等向高端的保健、醫藥領域發展。加快南極磷蝦研究進度有利于我國在南極磷蝦產業方面占據優勢地位。

生物堿主要來自于植物，又稱植物堿，具有鎮痛、緩解痙攣、抗菌、消炎、降血壓、平喘、抗腫瘤等功效。動物源的生物堿主要來源于兩棲類、海珊瑚、海綿等。雖有推測南極磷蝦中含有生物堿，但并未清楚生物堿的種類，而且目前關于南極磷蝦中的生物堿還未有相關文獻或專利報道。

因此，研究南極磷蝦生物堿的種類以及生物堿的提取純化及檢測方法，對南極磷蝦資源的開發利用具有十分重要的意義。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種南極磷蝦非酚性弱堿性生物堿提取純化及檢測方法。

為實現上述目的，本發明采用下述技術方案：

本發明的第一個目的是提供一種南極磷蝦非酚性弱堿性生物堿的提取純化方法，步驟如下：

(1)將南極磷蝦與甲醇接觸而進行提取，過濾，得濾液；濾液蒸發濃縮得到甲醇膏；

(2)將步驟(1)中的甲醇膏與乙醚接觸而進行浸提，過濾，得乙醚液；乙醚液蒸發后得到乙醚浸膏；

(3)將步驟(2)中的乙醚浸膏與乙醚接觸而進行溶解，得乙醚浸膏液，使其與酸水溶液接觸而進行萃取，萃取得到酸水相；

(4)將步驟(3)中的酸水相與氯仿接觸而進行萃取，萃取次數為3～4次，分離得到氯仿層A；

(5)將步驟(4)中的氯仿層A與氫氧化鈉水溶液接觸而進行萃取，分離得到堿水層和氯仿層B；

(6)將步驟(5)中的氯仿層B蒸發除去溶劑，即得到南極磷蝦非酚性弱堿性生物堿樣品。

步驟(1)中，南極磷蝦在接觸甲醇提取前先經過冷凍干燥處理。由于南極磷蝦體內的酶具有很高的活性，南極磷蝦被捕撈后，其體內的內源消化酶能高活性的降解蛋白質，使死亡后的組織快速分解，加速了南極磷蝦的自溶、腐敗和變質；通過對南極磷蝦進行冷凍干燥預處理，能夠防止南極磷蝦自溶，有效的保持南極磷蝦的品質。

步驟(1)中，所述南極磷蝦與甲醇加入量的比為1g:(6-10)mL，提取溫度為75～85℃，優選80℃，甲醇提取的次數為7～9次，每次浸提的時間為1-2h，提取方式可以為回流提取或攪拌提取。甲醇回流提取的次數選為7～9次，能夠盡可能多的分離提取出非酚性弱堿性生物堿。

步驟(2)中，所述甲醇膏與乙醚加入量的比為1g:(4-6)mL，加入乙醚浸提的次數為 4-6次，每次浸提的時間為0.5-1h。乙醚的提取次數選為4-6次，不僅有效分離出南極磷蝦中的非酚性弱堿性生物堿，還能盡量減少提取次數的增加所帶來的能源浪費。

步驟(3)中，不同條件所得乙醚浸膏量不同，乙醚復溶時加入乙醚的量可以根據實際情況進行調整。一般所述乙醚浸膏與乙醚的加入量比為1g：8～12mL(優選1g:10mL)，乙醚膏先用適量乙醚溶解，再與酸水萃取，可以增加與酸水的接觸面積，保證堿性物質充分溶于酸水層。

乙醚很容易旋蒸，即便全部整除，花費的時間也較短。其次實驗發現，用旋蒸保留的乙醚不能使乙醚浸提物全部溶解。

步驟(3)中，所述酸水溶液為硫酸水溶液或者酒石酸水溶液，優選的為硫酸水溶液；所述乙醚浸膏液與酸水溶液加入量的體積比為1:(10-30)。所述硫酸水溶液的體積分數為 1～3％，優選的，所述硫酸水溶液的體積分數為2％，選擇該濃度的硫酸水溶液既能保證足夠的酸性以去除酸性雜質，又防止硫酸濃度過高引起目的物的氧化分解。

步驟(4)中，所述酸水相和氯仿的體積比為1～2：1，優選的，所述酸水層和氯仿的體積比為1：1。氯仿與酸水相的攪拌萃取次數為3-4次，每次攪拌萃取時間為1～1.5h(優選攪拌時間為1h)，充分混勻，盡可能使目標物質溶于氯仿層。

本發明的萃取工序的萃取溶劑為氯仿時，不僅在萃取效率、分液性方面而且在萃取溶劑的易獲得性方面，特別優選。