[發明專利]一種利用花培單倍體篩選優良耐鹽株系的小麥耐鹽育種方法

有效

• 申請號: 201610564053.5
• 申請日: 2016-07-18
• 公開（公告）號: CN106171957B
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 朱俊科;趙檀芳;徐林生;馬甲良;高波
• 申請（專利權）人: 淄博禾豐種業科技有限公司
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 濟南智圓行方專利代理事務所(普通合伙企業)37231
• 代理人: 王華

1.一種利用花培單倍體篩選優良耐鹽株系的小麥耐鹽育種方法，其特征在于：該育種方法的步驟如下：

（1）篩選小麥耐鹽資源和育種主干親本：采用鹽池鑒定法對小麥資源庫各材料進行耐鹽性鑒定，選取相對鹽害指數低于8%的小麥品種或家系作為小麥耐鹽資源；選擇小麥耐鹽性不足但農藝性狀優良的地方主栽品種作為育種主干親本；正季種植小麥耐鹽資源和育種主干親本；

（2）確定小麥耐鹽篩選壓：選取步驟（1）種植的小麥耐鹽資源和育種主干親本的花藥分別進行花藥誘導培養獲得花藥愈傷，在分化培養基中加入梯度濃度的NaCl溶液，然后將小麥耐鹽資源和育種主干親本的花藥愈傷轉移到該分化培養基中進行分化培養，篩選小麥耐鹽資源和育種主干親本花藥愈傷分化率均為0.75%～1.5%的分化培養基添加的NaCl濃度， 將二者的平均值濃度的NaCl溶液確定為小麥耐鹽篩選壓；

（3）將小麥耐鹽資源和育種主干親本雜交，獲得F1雜交種：將步驟（1）正季種植的小麥耐鹽資源和育種主干親本雜交，獲得F1雜交種；

（4）F1雜交種花培獲得單倍體植株：F1雜交種正季播種種植，選取健壯主穗花藥進行花藥誘導培養，獲得花藥愈傷組織，并挑選直徑0.5～0.8cm的花藥愈傷接種于添加了小麥耐鹽篩選壓的分化培養基中分化培養，獲得單倍體植株；

（5）單倍體植株繼代壯根：待單倍體植株苗長至3～5cm之后轉接于生根培養基進行繼代壯根，15d后可觀察到單倍體植株生長出旺盛的白色根系，打開封口膜煉苗；

（6）單倍體植株浸根加倍：將壯根并煉苗后的小麥單倍體植株取出，洗凈根部培養基殘留，剪去部分根須，留根長度2～3cm，用添加了2%二甲基亞砜+0.5‰秋水仙堿溶液浸泡根系，25℃條件下處理24h，處理結束后再用清水將藥液沖洗干凈，然后將植株移栽到溫室中，遮陰5～7d后常規栽培管理；

（7）花培苗單株收種獲得花培家系，進一步農藝性狀、耐鹽性篩選獲得小麥耐鹽新品系：溫室種植小麥花培苗，單株收種獲得小麥耐鹽新家系，不同花培家系進一步大田播種，農藝性狀、耐鹽性篩選獲得農藝形狀良好且耐鹽性得到改良的小麥新品系；

所述步驟（2）和步驟（4）中小麥花藥誘導培養的過程如下：

（a）花藥取材與低溫預處理：花培材料常規大田種植，4月中下旬小麥孕穗期時于每日9 點～11點取材小孢子發育處于單核晚期的主莖穗的中部小穗，剝掉旗葉外其他葉子，75%酒精擦拭表面后插入盛少許純凈水的燒杯中，用黑色塑料袋套住杯子，放入4℃冰箱低溫預處理3～5d；

（b）花藥接種：預處理后取出材料，用75%酒精消毒幼穗表面，然后放進超凈工作臺，從旗葉中撥出麥穗放入滅菌過的消毒盒中，倒入1‰升汞溶液至幼穗浸沒，期間不時晃動瓶子，保證幼穗與消毒液浸泡均勻，消毒10min后，將幼穗用無菌水沖洗3～4次，用消毒后的鑷子夾取幼穗中部小穗兩邊的花藥，最后用消毒過的剪刀剪開花藥上部，抖藥法接種花藥于小麥花藥誘導培養基上；

（c）誘導培養：將小麥花藥誘導培養基置于24～26℃的黑暗環境中誘導愈傷組織，30～ 40天后在花藥的邊緣出現白-淡黃色的無定型細胞團，即小麥花藥愈傷組織；

所述步驟（b）和（c）中的小麥花藥誘導培養基為改良癸培養基，其配方為：NH₄NO₃200mg/L，KNO₃ 1400mg/L，KH₂PO₄ 500mg/L，CaCl₂ 150mg/L，MgSO₄?7H₂O 100mg/L，Na₂-EDTA 37.25mg/L，FeSO₄?7H₂O 27.85mg/L，MnSO₄?4H₂O 4.0mg/L，ZnSO₄?7H₂O 2.0mg/L，生物素 2.0mg/L，H₃BO₃ 1.5mg/L，KI 1.0mg/L，CaSO₄?5H₂O 0.1mg/L，CoCl₂?6H₂O 0.2mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，維生素B1 1.0mg/L，維生素B6 0.5mg/L，煙酸 0.5mg/L，肌醇 100mg/L，KT 1.5mg/L，IAA 0.5mg/L，絲氨酸 0.25mg/L，谷氨酰胺 5.0mg/L，水解酪蛋白 0.4g/L，植物血凝素 3.5mg/L，AgNO₃ 5.0mg/L，幼穗提取液 25mg/L，瓊脂 7g/L，麥芽糖 90g/L，pH值為5.8；

所述幼穗提取液的獲取方法為：將小麥幼穗洗凈后稱取30g，切成碎片，加入 100ml蒸餾水，煮沸20min，用4～6層紗布過濾靜置，待沉淀后取上清液；

所述步驟（2）和（4）中的分化培養基的配方為：C17+蔗糖30g/L+瓊脂5.5g/L+ AgNO₃ 1.5mg/L+山梨醇80mol/L+NAA 0.15mg/L+KT 1.5mg/L+ABA 0.1mg/L，pH值為5.8；

所述步驟（5）中的生根培養基的配方為：1/2MS基本培養基+多效唑3.0g/L，pH值為5.8。