[發明專利]一種羅非魚枯草芽孢桿菌微生態制劑與飼料

有效

• 申請號: 201610563295.2
• 申請日: 2016-07-18
• 公開（公告）號: CN107629975B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 易敢峰;付維來;盧俊;汪攀;王寧;朱傳忠
• 申請（專利權）人: 福建大北農水產科技有限公司;淮安市淮陰大北農飼料有限公司;北京大北農科技集團股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/18;A23K50/80;C12R1/125
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，公開了一株能夠抑制無乳鏈球菌的枯草芽孢桿菌及其應用。本發明篩選到的枯草芽孢桿菌能夠顯著抑制無乳鏈球菌的代謝及生長，降低羅非魚養殖環境中無乳鏈球菌的數量，控制鏈球菌病的發生。本發明中枯草芽孢桿菌經過多次菌種選育，并可進行液體深層發酵，菌體經沉降板框過濾后，利用閃蒸干燥工藝，制備成飼料添加劑菌粉，按照比例添加到羅非魚顆粒料中，制備成含有活菌制劑的飼料產品，改善腸道菌群，提高抗病能力。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，篩選到一株能夠抑制羅非魚鏈球菌的枯草芽孢桿菌，并進行了發酵優化，制備成水劑產品和粉劑產品，并且能在水產飼料中應用。

背景技術

羅非魚(Tilapia)作為世界水產行業最主要的養殖品種之一，具有生長速度快、食性雜、肉質好、營養價值高、繁殖能力強等優點廣泛分布于熱帶亞熱帶的淡咸水域中。我國沿海地區特別是海南、廣東、福建、云南、廣西等省份養殖的羅非魚產量占世界一半以上。但是近些年來伴隨著羅非魚養殖面積和養殖密度越來越高由無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)感染引起的羅非魚鏈球菌病已經成為阻礙我國羅非魚養殖業健康持續發展的主要因素。近年羅非魚“鏈球菌病”呈現出全國爆發的趨勢，在每年的高溫季節尤其是7-9月份，發病率在50％以上，死亡率最高可達90％以上。

目前多采用抗生素來控制羅非魚鏈球菌的發生和傳染，這一養殖模式導致了養殖過程中抗生素濫用和殘留超標的問題，嚴重制約了羅非魚成品的出口和銷售，成為限制羅非魚產業發展的瓶頸問題。

發明內容

本發明從羅非魚的養殖環境中篩選到一株枯草芽孢桿菌，該枯草芽孢桿菌能夠抑制導致羅非魚鏈球菌病的無乳鏈球菌生長，能夠顯著的控制羅非魚鏈球菌病的發生和傳染，減少抗生素使用，降低羅非魚養殖風險，提高羅非魚的養殖效益。

首先，本發明提供一株能夠抑制羅非魚鏈球菌病的枯草芽孢桿菌新菌株。

本發明從羅非魚養殖水域中分離、經定向初篩和復篩得到一株枯草芽孢桿菌。其營養細胞細桿狀，其芽孢為橢圓或長桿形，孢子中生，孢囊稍膨大，后期孢子可完全脫落。在LB培養基固體平板上，12～16h內能形成菌落，菌落為圓形，或不規則，邊緣毛發狀，菌落土黃色，不透明，無褶皺。革蘭氏陽性。

利用細菌的通用引物對篩選到的菌株進行PCR鑒定：按細菌DNA提取試劑盒操作說明書提取模板DNA。使用16S rRNA保守序列的上游引物5’-AGAGTT TGA TCC TGG CTC AG-3’(SEQ ID No.2)和下游引物5’-GGT TACCTT GTT ACG ACT T-3’(SEQ ID No.3)擴增細菌16srRNA基因片段。經過測序得到該菌屬于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，擴增片段的測序結果見SEQ ID No.1。

利用LB培養基:胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L，對得到的枯草芽孢桿菌CD10進行了抑菌性、耐溫性能、發酵特性實驗。在平板測試過程中，發現CD10能夠顯著抑制無乳鏈球菌的生長，形成顯著透明抑制圈。CD10芽孢耐溫性能良好，芽孢在85℃水浴10min，芽孢存活率80％以上。

將篩選到的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)命名為CD10，于2016年3月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為：CGMCC No.12195。

本發明還提供該枯草芽孢桿菌的高密度發酵培養基，其含有KH₂PO₄ 0.8～1.5g/L，蔗糖2～4g/L，豆餅粉8～12g/L，FeSO₄ 0.25～0.5g/L，CaCO₃ 1～3g/L，MgSO₄ 2.5～3.5g/L，玉米面3～5g/L，魚粉6～10g/L，消泡劑0.05～0.1％，初始pH7.0～7.5。