[發(fā)明專利]25?羥基維生素D2和25?羥基維生素D3高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610554486.2
• 申請日: 2016-07-14
• 公開（公告）號: CN107621499A
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發(fā)明（設計）人: 朱監(jiān)寶;官培龍
• 申請（專利權(quán)）人: 上海可力梅塔生物醫(yī)藥科技有限公司;上海愛可賽默醫(yī)療器械有限公司;廣州可力質(zhì)譜醫(yī)療器械有限公司;江蘇可力色質(zhì)醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司31266
• 代理人: 崔佳佳,馬莉華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及質(zhì)譜檢測領(lǐng)域，具體地涉及25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測試劑盒

背景技術(shù)

維生素D為固醇類衍生物，麥角甾醇、麥角骨化醇，具有抗佝僂病作用，又稱抗佝僂病維生素維生素D家族成員包括維生素D1、D2、D3、D4和D5，對健康關(guān)系較密切的是D2(麥角鈣化醇)和D3(膽固化醇)它不僅僅只是一種脂溶性維生素，本質(zhì)上是具多種生理活性的一種激素，具有廣泛的生理代謝活性維生素D缺乏會引起佝僂病、手足抽搐、軟骨病等疾病，但是長期攝入過多的維生素D，將引起血管和器官鈣化因此定期檢測人體內(nèi)維生素D的水平，對于衡量人體維生素D補充效果，及維持人體健康具有重要的意義

維生素D可以通過皮膚合成或者食物攝取來產(chǎn)生維生素D半衰期約3小時,并與維生素D結(jié)合蛋白在一起；1,25-(OH)2維生素D2/D3半衰期約24小時,在血中含量極低；25-羥基維生素D是血中被檢測的標志物，因為它半衰期約為3周,較為穩(wěn)定,又是人體內(nèi)維生素D的主要儲存形式，通過檢測它可以確定總體維生素D的情況維生素D是維持骨骼健康的主要元素兒童期維生素D的嚴重缺乏將導致骨骼畸形，即佝僂病維生素D缺乏是繼發(fā)性甲狀旁腺機能亢進癥的常見病因25-羥基維生素D含量低還與骨密度低有關(guān)與其他臨床資料結(jié)合，檢測結(jié)果有助于判定骨代謝近年來發(fā)現(xiàn)維生素D與癌癥、心血管疾病、糖尿病等都有相關(guān)性，足量的體內(nèi)維生素D水平對癌癥、多發(fā)性硬化癥、糖尿病等有一定預防作用

維生素D缺乏的人群可以通過食物、陽光及維生素補充劑提高體內(nèi)維生素D含量，食物來源包括蛋黃，三文魚，金槍魚，魚肝油，牛肝，人造奶油，酸奶，奶酪等；補充劑提供的維生素D包含兩種形式：D2和D3兩種形式都有效，每一種都可以保證充足的維生素D水平但是2和3是不等同的D3是人體產(chǎn)生的形式，最近有研究表明D3在快速提高維生素D水平上可高達3倍，而且能維持更加長久補充劑量取決于年齡和危險因素推薦的膳食標準是70歲老人為600IU/天，71及以上為800IU/天一些研究人員提出，維生素D含量高可帶來多種健康益處，但是太多會造成傷害根據(jù)美國醫(yī)學研究所，超過4000IU/天，危害的風險會增加

25(OH)D2和25(OH)D3活性和治療效果差異大，維生素D3應作為首選補充劑，但維生素D2也不可或缺，分開檢測是單獨評價維生素D2和維生素D3活性及功能是必然要求；僅檢測25-羥基維生素D3會導致總25-羥基維生素D水平不準確，分別檢測25-羥基D2/D3才能正確評估維生素D水平和維生素D補充療法的療效因此，分別測定25-羥基維生素D2/D3可以直接反映生物體內(nèi)維生素D真實活性的水平，具有重要的臨床意義和療效判定意義

然而，現(xiàn)有技術(shù)中雖然有一些針對25(OH)D2和25(OH)D3的檢測方法，但是往往操作較為復雜(如需要萃取步驟)、檢測靈敏度較低，并且難以同時定量檢測25(OH)D2和25(OH)D3

因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的檢測靈敏度較高并且能夠同時定量檢測25(OH)D2和25(OH)D3的技術(shù)

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種檢測靈敏度較高并且能夠同時定量檢測25(OH)D2和25(OH)D3的技術(shù)

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測試劑盒，包括：

(1)質(zhì)控品，所述的質(zhì)控品中含有25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3；

(2)同位素內(nèi)標提取液，所述的同位素內(nèi)標提取液中含有25-羥基維生素D2-d3和25-羥基維生素D3-d3；

(3)稀釋液，所述的稀釋液為乙腈；

(4)轉(zhuǎn)化液，所述的轉(zhuǎn)化液為PTAD(4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮)；

(5)復溶液，所述的復溶液為甲醇；

(6)流動相添加劑A，所述的流動相添加劑A為飽和一元羧酸；

(7)流動相添加劑B，其中所述的流動相添加劑B為C1-C3胺化合物

在另一優(yōu)選例中，所述的C1-C3胺化合物選自下組：甲胺、乙胺、丙胺、或其組合

在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒還包括選自下組的部件：

96孔反應板、說明書

在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒還包括選自下組的部件：

對照品用于建立標準曲線

在另一優(yōu)選例中，所述的流動相添加劑B為甲胺

在另一優(yōu)選例中，所述飽和一元羧酸為甲酸、乙酸、丙酸、丁酸或其組合

在另一優(yōu)選例中，所述飽和一元羧酸為甲酸