[發(fā)明專利]一種稀有人參皂苷的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610550677.1
• 申請日: 2016-07-13
• 公開（公告）號: CN107456472A
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡坪;張敏;黃丹
• 申請（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號: A61K36/258
• 分類號: A61K36/258
• 代理公司: 上海三和萬國知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)31230
• 代理人: 陶芾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥提取領(lǐng)域，具體涉及人參皂苷的提取制備方法。

背景技術(shù)

稀有人參皂苷可以通過原人參二醇型皂苷和三醇型皂苷轉(zhuǎn)化制得，具有抗疲勞、擴(kuò)張血管、抑制肺癌、肝癌、腸癌等活性，還可以與其它抗癌藥物聯(lián)合使用，有效提高對癌癥的治療效果、提高人的生存質(zhì)量，因此可以廣泛用于醫(yī)藥和功能食品領(lǐng)域。

稀有人參皂苷在人參藥材中含量極低，其質(zhì)量百分比約為0.01～0.02％。如果直接從人參藥材中獲取上述稀有皂苷，則需要經(jīng)過多重處理步驟，耗費大量試劑。目前，稀有人參皂苷主要從價格昂貴的紅參藥材中提取，也可以通過水解的方法來獲取，方法包括酸水解、堿水解、酶水解和化學(xué)合成來制備。Bae E.A.(Biol.Pharm.Bull.2002,25(1):58-63)等利用0.1N的HCl催化水解2g人參皂苷Rb1，得到20(S)和20(R)-Rg3的混合物0.6g。成樂琴(Phytochemistry,2008,69:218-224)等利用微生物Microbacterium sp.GS514將人參皂苷Rb1轉(zhuǎn)化成20(S)-Rg3。Anufriev,VP(Carbohydrate Research,1997,304:179-182)等利用化學(xué)方法合成了人參皂苷Rg3。

稀有人參皂苷的水解方法中，酸水解的方法是最常見的，但是當(dāng)酸的強(qiáng)度、水解的溫度和水解時間控制不當(dāng)時候，容易造成水解不完全或者水解過度的情況，導(dǎo)致產(chǎn)率過低等結(jié)果。堿水解的方法不常用，一般堿水解用于對酸不穩(wěn)定的產(chǎn)物，堿水解條件的控制不當(dāng)會導(dǎo)致跟酸水解一樣的后果。微生物轉(zhuǎn)化人參皂苷，其優(yōu)點是選擇性強(qiáng)，但是存在菌種選擇困難、培養(yǎng)基用量大、后續(xù)除雜繁瑣及生產(chǎn)成本高等缺點。

擴(kuò)張床吸附是上世紀(jì)九十年代發(fā)展起來的新型分離純化技術(shù)，集澄清、濃縮和初步純化于一體，整個實驗過程可以減小離心或過濾等操作單元，降低分離純化的成本，簡化了純化工藝，是一項應(yīng)用廣闊的分離技術(shù)。擴(kuò)張床吸附主要用于生物樣品的分離純化，在天然活性成分的分離中也有報道。

擴(kuò)張床作為一種特殊化的流化床技術(shù)，在低流速條件下操作，能使床層達(dá)到穩(wěn)定的分級，故返混較小，接近于固定床。擴(kuò)張床吸附劑有一定的粒徑和密度分布，在操作過程中粒徑大的或密度打的吸附劑顆粒分布在床層底部，粒徑小的或密度小的顆粒分布在床層的上部。控制適當(dāng)?shù)牟僮鳁l件，就可以使顆粒在床體中的返混運動受到限制，從而使吸附劑達(dá)到分層的要求。分層后的擴(kuò)張床體具有高于固定床的孔隙率，這可以使固體顆粒穿過床體，這也是擴(kuò)張床能夠處理含有固體顆粒提取液的原因。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，克服現(xiàn)有稀有人參皂苷轉(zhuǎn)化分離技術(shù)的不足之處，提供一種稀有人參皂苷的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案是，一種稀有人參皂苷的制備方法，

(1)將水解酸溶液和人參藥材置于提取裝置中進(jìn)行提取；

(2)在提取一段時間后開啟泵，將提取液自下而上輸送至擴(kuò)張床柱內(nèi)，提取液中的目標(biāo)成分被大孔樹脂吸附后，吸附余液流回至提取裝置中繼續(xù)參與提取轉(zhuǎn)化；在此動態(tài)提取過程中，原人參二醇型和原人參三醇型人參皂苷在水解酸的作用下轉(zhuǎn)化水解為稀有人參皂苷Rg3、Rg2、Rg5、Rh1和Rh2等成分，稀有皂苷成分不斷被轉(zhuǎn)移至柱床內(nèi)的樹脂上；

(3)吸附完全后，關(guān)閉提取裝置，通過泵將洗脫劑自上而下輸入至擴(kuò)張床的柱體內(nèi)，同時對洗脫液進(jìn)行收集；

(4)洗脫完畢，通過泵將另一洗脫劑從擴(kuò)張床頂部自上而下輸送至擴(kuò)張床的柱體內(nèi)，完成柱的再生過程。

洗脫完畢后以人參皂苷Rb1、Rd、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1為對照品，檢測波長為203nm，采用高效液相測定人參皂苷的含量和轉(zhuǎn)化率。高效液相色譜分析中，色譜柱為C18柱；流速：0.8mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL；流動相，A:乙腈，B：0.01％磷酸水溶液。梯度洗脫程序：0.00～60.00min,A：15％～90％；60.01～70.00min，A：90％～100％。

水解酸是可以使原人參二醇和原人參三醇型皂苷發(fā)生水解并轉(zhuǎn)化為稀有皂苷的酸。

優(yōu)選的是，人參藥材與水解酸的比例是10克人參藥材對應(yīng)0.02mol-0.2mol水解酸。

根據(jù)本發(fā)明的稀有人參皂苷的制備方法，優(yōu)選的是，所述提取裝置為水浴加熱裝置或超聲提取裝置。

根據(jù)本發(fā)明的稀有人參皂苷的制備方法，優(yōu)選的是，所述的水解酸為酒石酸、檸檬酸、甲酸、乙酸和鹽酸等的某一種或其組合。