[發明專利]一種生姜的液體淺層快繁方法

有效

• 申請號: 201610546635.0
• 申請日: 2016-07-13
• 公開（公告）號: CN106171985B
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發明（設計）人: 張祖姣;黃光文;沈玉平
• 申請（專利權）人: 湖南科技學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙)33213
• 代理人: 劉元慧

1.一種生姜的液體淺層快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

1）材料熱處理：精選塊大、肉厚、色澤黃亮、芽眼飽滿、未腐爛的健壯姜塊，在自來水下洗凈泥土，用50%多菌靈500倍液浸泡30 min消毒，然后用高溫滅菌后的細沙覆蓋，置于恒溫培養箱內催芽，培養條件為溫度36-38℃，空氣濕度為70-80%，整個過程不需要光照，姜芽長出后，取培養箱中催芽的姜，50℃超高溫處理5 min用于接種；

2）外植體消毒與接種：切取經熱處理后1-2 cm的姜芽，自來水沖洗30 min，然后置于70%的乙醇中浸泡30 s，棄去乙醇，無菌水沖洗1次，再用10 % NaClO消毒10-15 min，棄去NaClO溶液，無菌水沖洗5次，瀝干水后，取出在超凈工作臺上利用雙目解剖鏡剝取0.2-0.4 mm的莖尖分生組織；

3）初代培養：將莖尖分生組織接種到初代培養基內進行培養，所述的初代培養基為：MS 培養基+2-3 mg/L的6-芐氨基腺嘌呤+0.1-0.3 mg/L的萘乙酸+7 g/L的瓊脂+30 g/L的食用白糖，pH值范圍為5.5-5.8；

4）繼代培養：選擇初代培養后苗高在3 cm以上，且具有3-6個腋芽的外植體，接種于繼代培養基中培養，待外植體產生叢生芽后，從每個叢芽上選擇1株，用滅菌的剪刀，剪取芽基部0.5 cm以上的植物材料，用酶聯免疫吸附法進行黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒檢測；然后用消毒后的解剖刀從無毒姜叢生芽切取帶兩個或兩個以上的芽，連帶基部切掉所有的根及0.5 cm以上部分的莖段，轉接至初代培養基中使腋芽伸長，苗高4 cm以上后再轉接至液體繼代培養基中繼續增殖，所述的繼代培養基為：MS培養基+10-30g/L的食用白糖+2-5 mg/ L的6-芐氨基腺嘌呤+0.1-0.5 mg/L的萘乙酸+0.1-1.7 g/L的抗氧化劑，pH值范圍為5.5- 5.8；

所述抗氧化劑為0.5 g/L的硫代硫酸鈉+0.1 g/L的硫脲+0.5 g/L的二硫蘇糖醇+0.5 g/L的半胱氨酸+0.1 g/L的抗壞血酸；

5）生根培養：選擇苗高3 cm以上，具有3-6個腋芽的外植體，接種于液體生根培養基中培養，所述生根培養基為：MS培養基+5-20 mg/L的食用白糖+0.1-0.4 mg/L的6-芐氨基腺嘌呤+0.2-0.6 mg/L的萘乙酸+0.4-2.0 mg/L的多效唑+100 g/L的土豆汁，pH值范圍為5.5- 5.8；

6）煉苗：將組培苗從培養室取出，放置于煉苗室中，溫度保持在22-29 ℃，濕度保持在70-75 %，避免陽光直射；放置3-4 d后，打開瓶蓋，讓幼苗逐漸適應外部環境，早晚用噴霧器對幼苗和室內進行噴霧濕度環境， 經過約1周的煉苗過程，即可移栽；

7）移栽：把重量比為蛭石:珍珠巖=1:1的基質放到經過消毒的營養袋中，每個處理100 袋。

2.如權利要求1所述的一種生姜的液體淺層快繁方法，其特征在于，步驟7）所述移栽時用鑷子把各組培苗從培養瓶中取出，分成單株，用清水沖洗干凈根上殘留的培養液，要做到不傷根，用500倍多菌靈溶液浸泡20 min，然后小心栽入營養袋中，澆足定根水，移栽后要用遮陽網遮蔭，常澆水和噴霧，濕度保持在75-85 %，溫度22-25 ℃之間；每周施1次0.1 %的尿素和0.2 %KH₂PO₄，同時進行病蟲害防治。

3.如權利要求1所述的一種生姜的液體淺層快繁方法，其特征在于步驟3）初代培養的培養條件為：培養溫度25-30 ℃，光照時間為每天照射12-14 h， 光照強度為1200-1500 Lx，培養時間為15-30 d。

4.如權利要求1所述的一種生姜的液體淺層快繁方法，其特征在于步驟4）繼代培養的培養條件為：培養溫度25-30 ℃，光照時間為每天照射12-14 h， 光照強度為1200-1500 Lx。

5.如權利要求1所述的一種生姜的液體淺層快繁方法，其特征在于步驟5）生根培養的培養條件為：培養溫度25-30 ℃，光照時間為每天照射12-14 h， 光照強度為1200-1500 Lx。