[發明專利]一種標識化合物慶大霉素殘留的分析方法

有效

• 申請號: 201610540113.X
• 申請日: 2016-07-10
• 公開（公告）號: CN107024549B
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發明（設計）人: 袁宗輝;陳冬梅;潘源虎;陶燕飛;彭大鵬;黃玲利;謝書宇;王玉蓮;劉振利
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.牛奶、豬和雞肌肉中標識化合物慶大霉素的殘留分析方法，其特征在于：所述的方法包括以下步驟：

(1)樣本的前處理步驟，稱取牛奶、豬和雞肌肉5±0.05g置于聚丙烯離心管中，加入磷酸鹽緩沖液10mL，旋渦混勻3min，加入50％三氯乙酸水溶液5mL，旋渦混勻1min，于12000r/min 4℃離心15min，轉移上清液至另一聚丙烯離心管中，加入磷酸鹽緩沖液5mL和50％三氯乙酸水溶液2.5mL重復提取一次，合并兩次提取液，加正己烷5mL，旋渦混勻2min，于4℃12000r/min離心15min，棄去正己烷層，水層備用；

磷酸鹽緩沖液的配制：取氯化鈉18g，二水磷酸氫二鈉4.4g，磷酸二氫鈉

1.1g，用適量蒸餾水溶解，最后用10mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH至7.4，加蒸餾水稀釋至1000mL；

(2)凈化步驟：固相萃取小柱依次用甲醇、水、2％甲酸水溶液各3mL活化，取備用液上柱，依次用2％濃度的甲酸水溶液3mL，甲醇3mL淋洗一次，再用1％濃度的氨化甲醇溶液淋洗兩次，每次3mL，吹干柱子，最后用5％濃度的氨化甲醇4mL洗脫，收集洗脫液；在低于35℃水浴中用氮氣吹干；

(3)衍生化步驟：將慶大霉素樣本吹干后，用0.4mL的硼酸緩沖液溶解，加0.6mL衍生化試劑9-芴甲基氯甲酸酯；衍生化反應體系中慶大霉素與9-芴甲基氯甲酸酯的摩爾比為1∶50～100；硼酸緩沖液濃度為0.5mol/L；反應中混合液的pH值為8.5～9.5，反應溫度為20～35℃；反應時間為25～35min；

硼酸緩沖液的配制：稱取硼酸3.1g，用適量水溶解后用10mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH至9.0，用水溶解并稀釋至100mL；

高效液相色譜-熒光檢測的技術條件：

高效液相色譜柱：Thermo BDS C18柱，250mm×4.6mm×5μm；

流動相：乙腈:水＝88:12；

流速：1.0mL/min；

檢測波長：Ex 260nm，Em 315nm。