[發明專利]一種春蘭根狀莖組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201610535128.7
• 申請日: 2016-07-07
• 公開（公告）號: CN106035090B
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發明（設計）人: 方中明;曾麗婷;黃瑋婷
• 申請（專利權）人: 武漢生物工程學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙)42222
• 代理人: 張火春

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體為春蘭的根狀莖組織培養快速繁殖方法。

背景技術

春蘭又名草蘭、撲地蘭、朵香等，屬于蘭屬中的地生種。春蘭植株小，葉片較細狹，花色通常以綠色和黃色為主。花被上有紫紅色條紋或斑點，多數春蘭花香濃郁、色彩淡雅、花姿優美、葉態飄逸，是龐大蘭科家族中獨特的種屬，也是我國蘭屬植物的主要類群之一,分布廣、資源豐富、栽培歷史悠久。具有極高的觀賞價值、藥用價值和收藏價值。其市場需求十分旺盛，野生春蘭遭到過度采挖，野生自然資源急劇減少，是國家重點保護的野生植物之一。

為保護春蘭野生資源、滿足市場需求，解決春蘭的快速繁殖勢在必行。春蘭種子沒有胚乳，自然條件下極難萌發。春蘭傳統上主要靠分株繁殖，但繁殖周期長而且繁殖率低，不能形成規模種植，繁殖的蘭花品質也不高，無法滿足當今社會的需求。所以，具有繁殖速度快、周期短、可以規模化生產等優點的植物組織培養技術是春蘭快速繁殖的一條有效且重要的途徑。蘭科植物組織培養的過程中，由種子誘導出的原球莖進一步生長伸長即成為根狀莖，根狀莖是國蘭快速增殖的良好材料，是快速繁殖提高增殖系數的關鍵。但春蘭在離體培養特別是批量培養時，根狀莖增殖速度慢，分化形成的苗少，且培養過程中容易發生褐化導致一部分外植體死亡。因此探究春蘭根狀莖增殖培養基和分化培養基的優化可以極大的促進春蘭繁殖，利于擴大春蘭市場。本發明旨在找到一種春蘭根狀莖快速增殖和分化、并能有效減少褐化率的培養基，縮短培養周期、降低生產成本，使春蘭實現規模化生產，滿足市場需求。

發明內容

本發明針對現有技術中春蘭組織培養周期長、褐化率高、生產成本高的不足，提供一種春蘭根狀莖組織培養快速繁殖方法。本發明通過培養基的設計，實現春蘭的快速繁殖，其過程包括準備春蘭無菌根狀莖、春蘭根狀莖的增殖和春蘭根狀莖的分化。

本發明一種春蘭根狀莖組織培養快速繁殖方法，按以下步驟進行：

(1)準備無菌根狀莖：準備無菌，生長狀態良好的有分枝的根狀莖，直徑約為2mm，切成1cm長度備用；

(2)根狀莖增殖：將無菌春蘭根狀莖接種至增殖培養基中，所述增殖培養基配方：1/2MS+NAA 9mg/L+香蕉汁50g/L+梨汁100g/L+獼猴桃汁100g/L+瓊脂7g/L+蔗糖30g/L+活性炭1g/L，pH5.8；60天后增殖9倍左右；

(3)根狀莖分化：將增殖了60天的1cm長的根狀莖轉至分化培養基中，15天后有幼芽的分化，60天后可長成較大小芽，每個根狀莖小芽數量平均3-4個左右；所述分化培養基配方：1/2MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 0.1mg/L+維生素C 0.45mg/L+維生素E 0.05mg/L+檸檬酸鈉1g/L+山梨酸鉀0.15g/L+瓊脂7g/L+蔗糖30g/L，pH5.8。

與現有技術相比，本發明具有以下優點和效果：

(1)本發明方法使用的外植體為春蘭根狀莖，接種容易且不易污染，增殖分化速度快，增殖率高，外植體和培養基的褐化率低，不需要頻繁的繼代接種，就可長成較大小苗。

(2)本發明方法使用的增殖培養基添加的天然復合物獼猴桃和梨汁可以促進根狀莖細胞的分裂，從而達到快速增殖的目的。

(3)本發明方法使用的分化培養基添加了維生素C、維生素E、檸檬酸鈉和山梨酸鉀，其復合使用能促進根狀莖快速分化成芽，并防止根狀莖和培養基褐化。

附圖說明

圖1為春蘭根狀莖在不同的增殖培養基上增殖；

A為在無獼猴桃和梨汁培養基(A)上根狀莖的增殖；

B為在有獼猴桃和梨汁培養基(B)上根狀莖的增殖；

圖2為春蘭根狀莖在不同的分化培養基上分化；

A為在無維生素C、維生素E、檸檬酸鈉和山梨酸鉀培養基(C)上根狀莖的分化；

B為在有維生素C、維生素E、檸檬酸鈉和山梨酸鉀培養基(D)上根狀莖的分化；

圖3為生長壯大的春蘭試管苗；

具體實施方式

通過以下詳細說明結合附圖可以進一步理解本發明的特點和優點。所提供的實施例僅是對本發明方法的說明，而不以任何方式限制本發明揭示的其余內容。

本發明所用春蘭根狀莖來自武漢生物工程學院科研樓細胞工程實驗室。

所用試劑采購廠家分別為：1/2MS粉末：上海宇涵生物科技有限公司；NAA：北京康倍斯科技有限公司；蔗糖：天津市恒興化學試劑制造有限公司；瓊脂：北京康倍斯科技有限公司；活性炭：北京康倍斯科技有限公司。