[發明專利]一種基于適配體夾心熒光淬滅技術檢測去甲基睪酮的方法

有效

• 申請號: 201610533730.7
• 申請日: 2016-07-07
• 公開（公告）號: CN106124781B
• 公開（公告）日: 2018-01-02
• 發明（設計）人: 陳愛亮;白文薈;朱超;劉金釧;顏朦朦;楊曙明
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,白艷

1.一種適配體夾心熒光淬滅法檢測待測樣品中是否含有19-去甲睪酮的方法，包括如下步驟A：

1)將能結合去甲睪酮的核酸適配體1和能結合去甲睪酮的核酸適配體2與待測樣品混勻得到反應體系，反應，得到待測樣品反應產物；以不加入待測樣品為對照，得到對照反應產物；

所述核酸適配體1和所述核酸適配體2分別標記熒光基團和淬滅基團；

2)檢測待測樣品反應產物和對照反應產物的熒光強度，根據二者的熒光強度強弱比較，確定待測樣品中是否含有19-去甲睪酮；

所述核酸適配體1的核苷酸序列為序列1；

所述核酸適配體2的核苷酸序列為序列2；

所述核酸適配體1的3’末端標記淬滅基團，且所述核酸適配體2的5’末端標記熒光基團；

或所述核酸適配體1的5’末端標記淬滅基團，且所述核酸適配體2的3’末端標記熒光基團。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述檢測待測樣品反應產物和對照反應產物的熒光強度，根據二者的熒光強度強弱比較，確定待測樣品中是否含有19-去甲睪為如下：

若待測樣品反應產物的熒光強度小于對照反應產物的熒光強度，則待測樣品中含有或候選含有19-去甲睪酮；若待測樣品反應產物的熒光強度大于等于對照反應產物的熒光強度，則待測樣品中不含有或候選不含有19-去甲睪酮。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述淬滅基團為BHQ；所述熒光基團為6FAM。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述反應體系中，所述核酸適配體1和所述核酸適配體2的摩爾比為1:1；

所述反應的條件為避光反應20min；

所述檢測的條件為Ex為480nm，Em為520nm。

5.一種適配體夾心熒光淬滅法檢測待測樣品中19-去甲睪酮含量的方法，包括如下步驟：

1)權利要求1-4中任一所述方法中的步驟A，得到待測樣品反應產物的熒光強度；

2)重復所述步驟A，且將所述步驟A中的待測樣品替換為不同濃度的19-去甲睪酮標準品溶液，得到不同濃度的19-去甲睪酮標準品溶液反應產物的熒光強度；以不同濃度的19-去甲睪酮標準品溶液的濃度log作為橫坐標，不同濃度的19-去甲睪酮標準品溶液反應產物的熒光強度作為縱坐標制備標準曲線；

3)將所述待測樣品反應產物的熒光強度代入所述標準曲線中，得到待測樣品中中19-去甲睪酮含量。