[發明專利]一種人源化單克隆抗體及應用

有效

• 申請號: 201610527710.9
• 申請日: 2016-07-06
• 公開（公告）號: CN107586335B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 高福;秦成峰;嚴景華;鄧永強;戴連攀;施一;李曉峰;仝舟;路希山;宋健
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所;中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 耿曉岳

本發明公開了一種人源化單克隆抗體及應用，屬于醫藥技術領域。本發明通過對鼠單克隆抗體2A10G6進行人源化改造，通過桿狀病毒表達鼠單克隆抗體2A10G6，獲得人源化抗體h2A10G6。本發明的h2A10G6抗體，對黃熱病毒，登革熱和西尼羅熱病毒的高親和力和中和活性，可應用與臨床治療和預防黃熱病毒、登革熱病毒以及西尼羅熱等病毒。

技術領域

本發明涉及一種人源化單克隆抗體及應用，屬于醫藥技術領域。

背景技術

黃病毒是一類囊膜單股正鏈RNA病毒，包括寨卡(ZIKV)、登革熱(DENV)、西尼羅熱(WNV)、黃熱(YFV)等對人有致病力的病毒。這些病毒主要由蚊蟲傳播，感染之后對人產生嚴重的后果。黃熱病毒感染主要引起發熱、肌肉疼痛(腰痛和下肢疼痛等)、頭痛、寒戰、食欲不振、惡心和嘔吐，嚴重的產生高熱、黃疸腹痛并伴有嘔吐，甚至死亡；登革熱感染則引起高熱、頭疼、肌肉骨關節疼痛等臨床表現，是東南亞地區兒童死亡的主要原因之一；西尼羅熱病毒感染嚴重時將引起無菌性腦膜炎，甚至死亡。這幾種病毒都尚缺乏有效的疫苗和治療手段。

中和抗體特異性高、能阻斷病毒的入侵，是治療病毒感染的有效手段。黃病毒囊膜蛋白E蛋白介導病毒與宿主受體的結合和入侵，是病毒最主要的保護性抗原。大部分的中和抗體都識別黃病毒的E蛋白。X-射線晶體學結構顯示黃病毒E蛋白有三個結構域：DI、DII和DIII。一般認為DIII負責介導病毒與受體的結合，大多數有效的中和抗體都是識別DIII的中和表位。DII頭部(98-110位氨基酸)包含一個高度保守的融合區(fusion loop)，在病毒入侵的膜融合過程中起關鍵作用。DIII在黃病毒中保守程度不高，而DII的融合區保守度很高，因此有報道黃病毒的廣譜的中和抗體通過識別DII的融合區表位，從而中和不同的黃病毒。

鼠單克隆抗體2A10G6是一個黃病毒廣譜的中和抗體，能夠識別E蛋白的融合區表位，結合并中和登革熱病毒1-4型、黃熱病毒、西尼羅熱病毒。由于2A10G6為鼠單克隆抗體，尚不能應用于臨床上，所以抗體亟需進行改進以使其能夠獲準臨床使用。

因此，亟需找到一種有效的能夠獲準臨床使用的具有防治黃熱病毒，登革病毒各血清型以及西尼羅熱病毒的中和抗體。目前的鼠單克隆抗體的人源化改造，一般是保留CDR區，而其他部分都由鼠的替換成人的。然而，這樣替換常常會導致抗體的構想發生變化，進而導致親和力下降甚至消失。

發明內容

為了解決上述問題，本發明對鼠單克隆抗體2A10G6進行人源化改造，通過桿狀病毒表達，獲得人源化抗體h2A10G6。本發明的h2A10G6抗體，對黃熱病毒，登革熱和西尼羅熱病毒的高親和力和中和活性，可應用與臨床治療和預防黃熱病毒、登革熱病毒以及西尼羅熱等病毒。

本發明的第一個目的是提供一種人源化單克隆抗體，所述抗體含有氨基酸序列為SEQ ID NO:1的重鏈可變區和氨基酸序列為SEQ ID NO:2的輕鏈可變區。

在本發明的一種實施方式中，所述抗體的重鏈的氨基酸序列為SEQ ID NO:3、輕鏈的氨基酸序列為SEQ ID NO:4。

在本發明的一種實施方式中，所述抗體的重鏈的核苷酸序列為SEQ ID NO:5、輕鏈的核苷酸序列為SEQ ID NO:6。

本發明的第二個目的是提供所述人源化單克隆抗體在制備治療或預防黃病毒的藥物方面的應用。

在本發明的一種實施方式中，所述應用，是用于制備試劑盒；所述試劑盒中含有所述抗原，或者編碼所述抗原的DNA分子，或者表達所述抗原的重組載體/表達盒/轉基因細胞系/重組菌。

在本發明的一種實施方式中，所述黃病毒，包括黃熱病毒、登革熱病毒1-4型以及西尼羅熱等病毒。

本發明的第三個目的是提供一種藥物組合物，所述藥物組合物含有所述的人源化單克隆抗體。