[發明專利]一種ZnT8特異性單鏈抗體scFv?C27及其應用

有效

• 申請號: 201610523803.4
• 申請日: 2016-07-04
• 公開（公告）號: CN106084051B
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發明（設計）人: 張梅;張曉;楊濤;吳倩;陳恒;秦瑤
• 申請（專利權）人: 張梅
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;A61K39/395;A61P3/10;G01N33/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司32218
• 代理人: 傅婷婷,徐冬濤

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，涉及一種抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體scFv-C27及其應用。

背景技術

鋅轉運體(ZnT)是一組將鋅離子由胞內轉運出胞外的跨膜蛋白，與ZIP家族蛋白共同維護細胞內外鋅離子的平衡。2004年，Cheimienti等首次在ZnT家族中發現ZnT8蛋白，它由SLC30A8基因編碼，高度特異的表達在胰腺中，后進一步研究發現ZnT8特異的表達在胰島β細胞上，在INS-1細胞中過表達ZnT8可促使鋅離子的聚集并增強糖刺激后的胰島素釋放。這些研究表明ZnT8在胰島素的合成和分泌中發揮重要作用。

1型糖尿病(T1D)是由T淋巴細胞介導，以選擇性破壞胰島β細胞為特征的器官特異性自身免疫性疾病。胰島β細胞上存在著多種自身抗原，如胰島素，谷氨酸脫羧酶(GAD)，酪氨酸磷酸酶和ZnT8。其中，ZnT8被認為是T1DM的一個重要的自身抗原，Wenzlau等發現部分T1D高?；颊甙l病前2年即可檢測到ZnT8自身抗體且長期維持在較高水平。我們前期研究發現ZnT8存在著多個抗原表位可被1型糖尿病患者自身反應性T細胞識別，且ZnT8抗體水平與T1D的發展存在著顯著相關性。早期檢測ZnT8抗體和ZnT8特異性CD8+T細胞是預測和診斷T1D的重要手段。針對ZnT8靶點的特異性治療將成為阻止T1D進展的潛在方法。

抗體研究迄今已有100多年歷史，1975年Kohler和Milstein創立B淋巴細胞雜交瘤技術，鼠源單克隆抗體被廣泛應用于疾病的診斷和治療，但由于鼠源單克隆抗體對人體有免疫原性，易產生人抗鼠抗體反應(human anti-mouse antibody，HAMA和超敏反應，且由于其分子量較大，難以穿膜等缺點，限制了其在疾病治療領域的應用。自20世紀八十年代中期，隨著分子生物學的技術進展，國外學者建立了噬菌體抗體庫技術。由于噬菌體表達的scFv抗體分子量較小，僅為完整抗體分子的六分之一，且具有較好的血管或組織屏障穿透性、半衰期短、結構穩定、不含Fc段，減少了與體內Fc受體結合而帶來的不利影響等優勢，已廣泛地應用于分子生物學及免疫學、藥理學等醫學領域，是目前的研究熱點。但目前尚未見抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體的相關報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供一種抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體。

本發明的另一目的是提供該單鏈抗體的應用。

本發明的目的可通過以下技術方案實現：

抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體scFv-C27，包括重鏈和輕鏈，

所述的輕鏈的可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述的重鏈的可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體的氨基酸序列優選如SEQ ID NO.5所示。

一種編碼本發明所述的抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體scFv-C27的基因，其中，

編碼輕鏈的可變區的基因序列如SEQ ID NO.3所示；

編碼重鏈的可變區的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

編碼本發明所述的抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體scFv-C27的基因的核苷酸序列優選如SEQ ID NO.6所示。

本發明所述的抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體scFv-C27在制備1型糖尿病診斷、治療和/或預后判斷試劑中的應用。

本發明所述的編碼編碼權利要求1所述的抗1型糖尿病ZnT8特異性單鏈抗體scFv-C27的基因在制備1型糖尿病診斷、治療和/或預后判斷試劑中的應用。

有益效果：

本發明首次從T1D病人外周血基因中構建了一個庫容達1×10⁸的scFv噬菌體抗體庫。我們招募了50例初發的T1D患者以保證庫的特異性、多樣性和代表性。從該庫中，我們可以篩選T1D的各種自身抗體。