[發明專利]一種自然殺傷細胞(NK細胞)培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 201610522618.3
• 申請日: 2016-07-05
• 公開（公告）號: CN107574148B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 魏輝;韓化敏
• 申請（專利權）人: 拜西歐斯（北京）生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00;A61P31/00;A61P37/02
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

本申請提供了用于培養自然殺傷細胞(NK細胞)的培養基，其包含IL?2和抗腫瘤藥物。本申請還提供了用于培養NK細胞的培養基，其包含IL?2和香菇多糖。本申請還提供了利用所述培養基培養NK細胞的方法、通過所述方法獲得的NK細胞以及所述細胞的用途。

技術領域

本申請大體涉及生物醫學領域，具體而言，本申請涉及用于培養自然殺傷細胞(NK細胞)的培養基，使用其培養NK細胞的方法，使用該方法獲得的NK細胞以及所獲得NK細胞的用途。

發明背景

自然殺傷細胞(NK細胞)被認為是機體抗感染、抗腫瘤的第一道天然防線，是機體重要的免疫細胞，與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調節密切相關。NK細胞起源于骨髓來源的CD34⁺造血祖細胞，約占外周血淋巴細胞的5％-15％，其免疫表型特點為CD3^-CD16⁺CD56⁺，主要分布于外周血、淋巴結、脾和骨髓，也可以在不同化學趨化因子作用下遷移到炎癥部位。

NK細胞最初被發現時被命名為大顆粒淋巴細胞，并發現其可以在無需預先致敏的情況下發揮細胞毒作用。NK細胞可直接或間接對腫瘤細胞起到殺傷作用，抑制腫瘤細胞的增殖和遠處轉移，起到免疫監視的作用，而且NK細胞的抗腫瘤作用具有廣譜性，其不顯示腫瘤殺傷的特異性和MHC限制性。有臨床研究顯示NK細胞功能低下的人罹患腫瘤的風險顯著增加。

目前NK細胞常用的擴增技術有：利用添加有多種細胞因子的組合的培養基進行培養，利用飼養層細胞激活與促進NK細胞的擴增以及利用磁珠分選等。但是這些技術普遍存在成本高、擴增倍數低、細胞純度低、培養周期長等問題。

因此，本領域目前亟需其他可用于培養NK細胞的工具和方法。

發明概述

第一方面，本申請提供了用于培養自然殺傷細胞(NK細胞)的培養基，其包含白介素-2(IL-2)和抗腫瘤藥物。

在一些實施方案中，抗腫瘤藥物為A群鏈球菌制劑。

在一些實施方案中，A群鏈球菌制劑為沙培林或康賽寧

在一些實施方案中，培養基還包含抗CD16抗體。

在一些實施方案中，培養基包含用于淋巴細胞培養的基礎培養基。

第二方面，本申請提供了用于培養NK細胞的培養基，其包含IL-2和香菇多糖。

在一些實施方案中，培養基還包含自體血漿。

在一些實施方案中，培養基包含用于淋巴細胞培養的基礎培養基。

第三方面，本申請提供了用于培養NK細胞的培養基套裝，其包括第一方面所述的培養基以及第二方面所述的培養基。

第四方面，本申請提供了培養NK細胞的方法，所述方法包括：

(1)提供用抗CD16抗體包被的培養器；

(2)將單核細胞接種于添加第一方面中不包含抗CD16抗體的培養基的步驟(1)的培養器中進行培養；以及

(3)收集步驟(2)中獲得的細胞，并將獲得的細胞接種于第二方面所述的培養基中進行培養。

在一些實施方案中，單核細胞獲自個體的外周血。

第五方面，本申請提供了培養NK細胞的方法，所述方法包括:

(1)將單核細胞接種于第一方面中包含抗CD16抗體的培養基中進行培養；以及

(2)收集步驟(1)中獲得的細胞，并將獲得的細胞接種于第二方面所述的培養基中進行培養。

在一些實施方案中，單核細胞獲自個體的外周血。