[發明專利]一種高耐藥性Huh-7-DN肝癌細胞株

有效

• 申請號: 201610514352.8
• 申請日: 2016-07-04
• 公開（公告）號: CN107574152B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 吳健;丁佳;周笑天
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發明屬微生物動物細胞系領域，涉及一種具有高耐藥性的人肝癌細胞株Huh?7?DN及其建立方法，其保藏編號：CGMCC No.12253。本細胞系為人源性細胞，與其親本細胞相比，具有以下生物學特性：流式細胞鑒定結果顯示其穩定表達CD133/EpCAM雙陰性的細胞表面分子標記；呈現上皮細胞間質轉化（EMT）特征、高豪豬信號活性和高耐藥的特點，并高表達多藥耐藥相關ABCC1轉運蛋白。本發明所述的具有高耐藥性的人肝癌細胞株Huh?7?DN可作為人肝細胞癌多藥耐藥的研究細胞模型，其具有獨特的分子生物學特性、異質性、多態性，有助于應用在揭示人肝細胞癌的耐藥機制和化療藥物的篩選。

技術領域

本發明屬微生物動物細胞系領域，具體涉及一種具有高耐藥性的人肝癌細胞株Huh-7-DN及其建立方法。

背景技術

資料顯示，肝細胞癌（HCC）是第三致命的和第五常見的惡性腫瘤，全球每年有超過70萬的新發病例。有研究報道，慢性乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染、非酒精性脂肪性肝炎及其他肝病是HCC的發病基礎。據調查，我國是HCC的高發地區，每年約有30萬的新發病例，占全球新發病例的一半。手術切除和肝移植是目前治療HCC的有效手段，但是，實踐顯示，大部分患者發現HCC時已處于中晚期，已無手術治療的指征；由于HCC對傳統的細胞毒性化療藥物相對耐藥，因此，作為備選的非手術療法——化療的療效和5 年生存率均不理想，其中僅有Raf-1激酶抑制劑，索拉非尼能延長進展期HCC患者的中位生存期數月；但原發和繼發耐藥及遠處轉移，仍是造成進展期患者高死亡率的主要原因。HCC的高發病率和高死亡率不僅使患者承受極大的痛苦，同時治療所產生的費用也給患者家庭帶來極重的經濟負擔，因此研究HCC化療耐藥的機制，尋找改善化療敏感性的治療途徑顯得尤為重要，而建立穩定、可靠的高耐藥性肝癌細胞株則是當務之急。

現有公開的可用于研究肝癌細胞耐藥性的細胞株包括有Hep3B、Huh-7、HepG2、HLE和HLF等，本發明的前期研究發現，根據表面分子標記CD133和EpCAM的表達，可將人肝癌細胞株分成雙陽性和雙陰性兩種亞群，其中，CD133和EpCAM雙陰性表達的肝癌細胞中豪豬信號通路異常活化。與低豪豬信號活性的肝癌細胞相比，高豪豬信號活性的肝癌細胞對于順鉑、多柔比星和索拉非尼相對耐藥；研究還公開了通過檢測人肝癌細胞株Hep3B、HepG2、Huh-7、HLE、HLF和SKHep1中CD133和EpCAM的表達譜，發現Huh-7細胞中CD133和EpCAM雙陽性和雙陰性亞群的數量相近，而HepG2、HLE、HLF和SKHep1細胞中雙陰性亞群占70%以上。

基于現有技術的現狀，本申請的發明人擬提供一種具有高耐藥性的人肝癌細胞株，尤其是一種高耐藥性Huh-7-DN肝癌細胞株及其建立方法。

與本發明有關的參考文獻有：

[1] El-Serag HB, Rudolph KL. Hepatocellular carcinoma: epidemiologyand molecular carcinogenesis [J]. Gastroenterology 2007;132:2557-76.

[2] Tanaka S, Arii S. Molecularly targeted therapy for hepatocellularcarcinoma [J]. Cancer Sci 2009;100:1-8.

[3] Chen X, Lingala S, Khoobyari S, Nolta J, Zern MA, Wu J.Epithelial mesenchymal transition and hedgehog signaling activation areassociated with chemoresistance and invasion of hepatoma subpopulations [J].J Hepatol 2011;55:838-45.。

發明內容