[發明專利]嗜肺軍團菌1型化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201610506957.2
• 申請日: 2016-06-30
• 公開（公告）號: CN107561062A
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發明（設計）人: 宋永波;錢純亙;田永帥;夏福臻;王剛
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及體外檢測領域，尤其涉及一種嗜肺軍團菌1型化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

軍團菌是一種兼性胞內寄生菌，是引起人類軍團菌病的重要病原體。近年來，軍團菌病在世界各地時有爆發流行，我國已將其列入 14 種新發傳染病之一。據國外報道，院內不明原因肺炎感染有10％是由軍團菌引起。目前已知軍團菌雖有52個種，70多個血清型。但臨床上 80% 以上軍團菌感染是由嗜肺軍團菌1型引起。因此，嗜肺軍團菌1型的鑒定對于軍團菌病診斷具有重大價值。

目前嗜肺軍團菌1型的檢測主要有以下幾種方法 ：

一、酶聯免疫吸附法

酶聯免疫吸附法(ELISA) 被廣泛應用，但該方法也存在著下述的不足之處：

(1) 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96 孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12 批次、6 批次、8 批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；

(2) 定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

(3) 缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

(4) 檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；

(5) 檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差；

(6) 在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上均為項目數×48/96人份，如果需要檢測10 個項目，則試劑的配置及使用數須為10×48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10 個不同的項目，也需要配置10×48/96人份的試劑，存在著不夠經濟合理的缺點。

二、常規實驗室檢測—病毒分離法

實驗室診斷嗜肺軍團菌1型的金標準是病毒分離的方法。采用標本的時間以發病前5天為宜，取病人鼻咽棉拭子或咯痰進行病毒分離培養。但是病毒分離的方法具有嚴重的缺陷。因為它們既費時又費力，通常需要較長時間才能得到最終結果，這樣在臨床方面對病人的有效治療有一定的局限性。

三、基因診斷

對許多 RNA 病毒來說 RT-PCR 診斷方法比傳統的病毒分離和抗原診斷方法既快又靈敏。而且RT-PCR可以很容易的同時診斷多種病毒，另一些診斷方法如病毒分離和免疫熒光分析卻不能。 但該方法也有不足之處，如 PCR 技術，DNA擴增的高校性導致了極微量的污染既可出現假陽性，因而使結果失真。此外病毒作為外原基因的入侵者，必須在闡明其全部或部分核苷酸序列時，才可以設計引物或探針，進行核酸分子雜交和PCR檢測。

從現有的嗜肺軍團菌1型的檢測方法可見，EIA、病毒分離、RT-PCR診斷方法盡管都有一定的特異性和敏感性的優點，但在操作上需要專業技術人員、 專門的儀器設備和特定的條件及費時等缺點。

吖啶酯作為標記物的直接化學發光相比以上方法具有明細優勢，主要表現在：反應不需要催化劑，只要堿性環境即可進行，反應迅速，背景發光低，信噪比高，干擾因素少，試劑穩定性好，可以兩點定標，體系簡單，激發液成本低，吖啶酯易與蛋白質聯結，且聯結后光子產率不減少，已經成為嗜肺軍團菌1型體診斷新的發展方向。

發明內容

基于此，有必要提供一種檢測靈敏度較高的嗜肺軍團菌1型化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。

一種嗜肺軍團菌1型化學發光免疫檢測試劑盒，包括：嗜肺軍團菌1型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物。

在一個實施例中，所述嗜肺軍團菌1型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述嗜肺軍團菌1型重組蛋白與所述羧基化的磁微粒的比例為1：25~35。

在一個實施例中，所述抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物中，所述抗人免疫球蛋白與所述化學發光標記物的比例為50：1~10。

在一個實施例中，所述羧基化的磁微粒的粒徑為0.05μm~1μm。

在一個實施例中，所述化學發光標記物為魯米諾、異魯米諾、三聯吡啶釕或吖啶酯。

在一個實施例中，還包括化學發光底物液，所述化學發光底物液包括A液和B液。