[發(fā)明專利]一種富集分離唾液酸化糖肽的新材料及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610506699.8
• 申請日: 2016-07-01
• 公開（公告）號: CN107560920B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李智立;張沫
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種特異性富集唾液酸化糖肽的方法。本發(fā)明要求保護g?C₃N₄在富集唾液酸化糖肽和或唾液酸化聚糖和或唾液酸化糖苷中的應(yīng)用。本發(fā)明保護一種富集唾液酸化糖肽的方法，包括如下步驟：(1)將g?C₃N₄分散液加入到唾液酸化糖蛋白的酶切產(chǎn)物中，振蕩富集唾液酸化糖肽；(2)富集液離心后，向g?C₃N₄沉淀中加入洗脫液，得到唾液酸化糖肽溶液。本發(fā)明提供的方法基于環(huán)境友好、制備簡便、成本低廉的g?C₃N₄材料，富集條件溫和、特異性高，最大程度上保持唾液酸化糖鏈的結(jié)構(gòu)信息。該方法能真實地反映蛋白質(zhì)天然的糖基化狀態(tài)，在復(fù)雜樣本中唾液酸化糖肽的檢測和相關(guān)腫瘤標志物的篩查方面具有重要的應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種富集分離唾液酸化糖肽的新材料和新方法。基于石墨相氮化碳(g-C₃N₄)材料獨特三嗪環(huán)結(jié)構(gòu)中大量N原子可以與唾液酸化糖鏈O-H形成氫鍵的特性，以及共軛結(jié)構(gòu)特有的π相互作用吸附性能，在不破壞糖蛋白結(jié)構(gòu)的前提下，實現(xiàn)唾液酸化糖肽、唾液酸化聚糖或唾液酸化糖苷的高效、低成本、特異性富集分離。為復(fù)雜樣本中唾液酸化糖肽的檢測和相關(guān)腫瘤標志物的篩查等提供了新思路和新方法。

背景技術(shù)

在生物體的生命活動中，唾液酸化糖鏈起特異性識別和介導(dǎo)的作用，對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能有著極為重要影響。研究發(fā)現(xiàn)，人體內(nèi)唾液酸的表達與許多病理狀態(tài)有極為密切的聯(lián)系，如自身免疫疾病、心血管疾病、腫瘤發(fā)生進展、細菌病毒感染、神經(jīng)性疾病以及內(nèi)分泌異常等等。唾液酸化糖蛋白是一類重要的蛋白翻譯后修飾，可作為疾病標志物，對于深入研究疾病的發(fā)生機制和診斷治療等有非常重要的意義。復(fù)雜的生物樣品體系中唾液酸的豐度動態(tài)變化范圍很大，相當一部分的低豐度唾液酸化糖肽、唾液酸化聚糖或唾液酸化糖苷很容易受到其他成分非的抑制。因此唾液酸的研究所面臨的首要問題是對其有效的分離富集。

目前已有多種富集唾液酸化糖肽的方法，主要包括凝集素法、化學反應(yīng)法和親水材料色譜法等等。其中凝集素親和法是目前唾液酸化糖蛋白富集研究中應(yīng)用最廣泛的方法。凝集素可以特異性富集唾液酸，但是成本較高，結(jié)合力弱，也不利于進行高通量腫瘤標志物的篩查等工作。常用的化學反應(yīng)富集法包括硼酸化學反應(yīng)法和酰肼化學反應(yīng)法等，在高通量的糖基化位點尤其是N-型糖基化位點鑒定中，獲得了很好的應(yīng)用。然而此類方法化學反應(yīng)步驟較多，條件不易控制，并且化學反應(yīng)過程破壞了糖鏈的結(jié)構(gòu)，不利于進一步進行糖鏈類型和結(jié)構(gòu)的鑒定分析。而兩性離子型親水性色譜法以及強離子交換色譜法能夠非選擇性的富集各種類型的糖肽，但特異性較差，富集效率有待提高，且容易造成唾液酸信息丟失。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種富集唾液酸化糖肽的新材料及其新富集方法。

本發(fā)明要求保護氮化碳材料在富集唾液酸化糖肽中的應(yīng)用。

本發(fā)明還保護一種富集唾液酸化糖肽的方法，包括如下步驟：

(1)將g-C₃N₄分散液加入到唾液酸化糖蛋白的酶切產(chǎn)物中，振蕩富集唾液酸化糖肽；

(2)富集液離心后，向富集唾液酸化糖肽的g-C₃N₄沉淀中加入洗脫液，得到唾液酸化糖肽溶液。

上述的富集方法中，酶切產(chǎn)物是將唾液酸化糖蛋白進行酶切得到的產(chǎn)物。所述酶切具體為胰蛋白酶酶切。