[發明專利]抗透明帶抗體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201610503871.4
• 申請日: 2016-06-30
• 公開（公告）號: CN106645695A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 段桂開;黃濤;夏福臻;錢純亙;申國輝
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本發明涉及體外檢測領域，尤其涉及一種抗透明帶抗體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

透明帶是一層包繞著卵母細胞及著床前孕卵的非細胞性明膠樣酸性糖蛋白膜，主要由3 種糖蛋白組成的內含特異性精子受體，其作用是誘發精子頂體反應、精卵識別、結合、穿透和阻止多精子入卵，在正常生理情況下，精子與透明帶結合后，依靠精子的酶系統產生局部的溶解作用，受精后透明帶恢復完整性，保護受精卵的發育。

抗透明帶抗體在體內與透明帶結合，可以阻止精卵結合，干擾卵子與卵泡細胞間的反應，導致卵細胞和卵子閉鎖。抗透明帶抗體另一方面會使精子的運動能力下降，影響精子穿過宮頸黏液及上行，并影響精子獲能；另外還會對透明帶的孕卵產生損傷作用，結果導致不能正常發育而至流產。國內外研究均在不孕婦女中發現較高的透明帶抗體檢出率。因此抗透明帶抗體檢測對臨床診斷與治療不孕不育患者也有重要意義。

目前臨床檢測抗透明帶抗體的常見方法有酶聯免疫吸附法、酶促化學發光法，但這些方法都存在著一些不足之處。

一、酶聯免疫吸附法

酶聯免疫吸附法(ELISA) 被廣泛應用，但該方法也存在著下述的不足之處：

(1) 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96 孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12 批次、6 批次、8 批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；

(2) 定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

(3) 缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

(4) 檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；

(5) 檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差；

(6) 在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上均為項目數×48/96人份，如果需要檢測10 個項目，則試劑的配置及使用數須為10×48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10 個不同的項目，也需要配置10×48/96人份的試劑，存在著不夠經濟合理的缺點。

二、化學發光法

化學發光法按發光原理可分為直接化學發光和酶促化學發光。

酶促化學發光主要有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶兩種，但都有一定的局限性，辣根過氧化物酶主要缺點為：魯米諾在沒有辣根過氧化物酶存在情況下，也會被H2O2氧化自身發光，本底相對較高，影響信噪比，反應動力學復雜，影響因素多，結果不夠穩定，要得到靈敏度高且平臺期長的底物不容易。堿性磷酸酶主要缺點為：底物達到平臺期的時間長，底物成本高，導致檢測成本高，患者負擔重。

吖啶酯作為標記物的直接化學發光相比酶促化學發光具有明細優勢，主要表現在：反應不需要催化劑，只要堿性環境即可進行，反應迅速，背景發光低，信噪比高，干擾因素少，試劑穩定性好，可以兩點定標，體系簡單，激發液成本低，吖啶酯易與蛋白質聯結，且聯結后光子產率不減少。

發明內容

基于此，有必要提供一種檢測靈敏度較高的抗透明帶抗體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。

一種抗透明帶抗體化學發光免疫檢測試劑盒，包括：抗透明帶抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物。

在一個實施例中，所述抗透明帶抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述抗透明帶抗體重組蛋白與所述羧基化的磁微粒的比例為1：25~35。

在一個實施例中，所述抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物中，所述抗人免疫球蛋白與所述化學發光標記物的比例為50：1~10。

在一個實施例中，所述羧基化的磁微粒的粒徑為0.05μm~1μm。

在一個實施例中，所述化學發光標記物為魯米諾、異魯米諾、三聯吡啶釕或吖啶酯。

在一個實施例中，還包括化學發光底物液，所述化學發光底物液包括A液和B液。

在一個實施例中，所述A液為H₂O₂溶液，所述B液為NaOH溶液。

在一個實施例中，還包括抗透明帶抗體定標品。